Termodinámica del desplegado de proteína integrales de membrana inducido por SDS

ALVARO RECOULAT; F. LUIS GONZÁLEZ FLECHA

Buenos Aires

Conferencia; Latin American Conference on Mathematical Modeling of Biological Systems; 2015

Sociedad Argentina de Biofisica

p { margin-bottom: 0.25cm; line-height: 120%; }Elestudio del plegado proteico ha sido siempre uno de los grandesdesafíos en bioquímica y biofísica molecular. Aunque las proteínasde membrana constituyen aproximadamente un tercio de las proteínascodificadas en genes conocidos, estudios sobre su estabilidad yplegado son complicados debido a las limitaciones experimentales. Conpocas excepciones1,las proteínas integrales de membrana son resistentes a ladesnaturalización química por agentes como la urea o el cloruro deguanidinio. Sin embargo, el uso de detergentes iónicos como el SDS,ha resultado efectivo contra ellas2.La naturaleza anfifilica de los detergentes combina la posibilidad deperturbar la estructura terciaria y solubilizar elementos de laestructura secundarias ocultas dentro de las membranas biológicas. Enexperimentos de desplegado químico reversible se plantea el problemade manera simplificada suponiendo que existen en solución solo dosproteínas, nativa y desplegada, y que esta ultima aumenta suproporción en el equilibrio al aumentar la concentración del agentedesnaturalizante. Al considerar las contribuciones de cada especie enla señal registrada, se puede llegarestimarla fracción de cada una de ellas en las diferentes concentracionesde desnaturalizante, y a partir de esta información estimar el ∆Gºde la reacción de plegado. La utilización de detergentes trae comodificultad extra la formación de micelas al superar la concentraciónmicelar crítica. Esta particularidad debe ser considerada alplantear el modelo, para poder sacar las verdaderas constantestermodinámicas del proceso. En este trabajo, se ensaya el desplegadopor SDS de la ATPasa transportadora de cobre del microorganismotermófilo Archaeglobusfulgidus,así como también el dominio aislado soluble de unión a ATP de estaproteína.1.Roman EA. Arguello JM. Gonzalez Flecha FL. Reversible unfolding of athermophillic membrane protein in phospholipid/detergent mixedmicelles. J MOL Biol 2010. 397. 550-559.2.Roman EA. Gonzalez Flecha FL kinetics and thermodynamics of membraneprotein folding. Biomolecules 2014, 4, 354-373 Confinanciamiento de ANPyCT, CONICET y UBA.