IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
-“Modulación por ATP del proceso de oclusión directa de Rb+ en la Na+/K+-ATPasa”
Autor/es:
ALEJANDRO J. SPIAGGI, MÓNICA R. MONTES, JOSÉ L. MONTI, PATRICIO J. GARRAHAN Y ROLANDO C. ROSSI.
Lugar:
La Plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
El transporte activo de Na+ y K+ por la Na+/K+-ATPasa involucra estados de la bomba donde dichos iones se hallan “ocluidos”, esto es, inaccesibles al medio en contacto con ambas caras de la membrana. El intermediario con K+ ocluido puede formarse durante el ciclo fisiológico de la bomba, o en forma directa, en medios donde el K+ es el único ligando de la ATPasa. Ambas rutas llevan al mismo intermediario [1], y el K+ puede ser reemplazado por sus congéneres Rb+, Cs+ o Tl+. Se ha probado que la desoclusión de K+ y de Rb+ es acelerada por la unión del ATP a un sitio de baja afinidad [1-2], y que el ATP disminuye el nivel de equilibrio de las especies con Rb+ ocluido por la ruta directa [3]. Para ampliar esta información, estudiamos la cinética de oclusión directa de Rb+ por Na+/K+-ATPasa inserta en fragmentos de membrana, a 25ºC y pH 7,4; empleando [86Rb]RbCl 0,25mM y [ATP] entre 0 y 2mM. Los resultados indican que la velocidad inicial de oclusión disminuye en forma monotónica con [ATP]. A su vez, el incremento de la concentración de Rb+ ocluido tanto en ausencia como en presencia de concentraciones de ATP inferiores a 0,5mM, puede ser descripto por dos fases exponenciales. Éstas siguen a una fase inicial cuya velocidad supera la detectable con la técnica empleada, siendo sólo posible determinar su amplitud como una ordenada al origen que decrece rápidamente sin desaparecer al aumentar [ATP]. El ATP induce una disminución de la constante de la primera fase exponencial (k1), mientras que la de la segunda (k2) evoluciona mostrando un máximo. Por otra parte, la oclusión en medios con mayor [ATP] es descripta por la mencionada ordenada al origen y una única fase exponencial, cuya constante parece continuar la tendencia de los valores de k1 y variar sólo levemente con el incremento de [ATP]. Parte de estos resultados coinciden con los obtenidos previamente en nuestro laboratorio empleando la sonda eosina en lugar de ATP [4], y contradicen aquéllos obtenidos por Hasenauer y col. [5], quienes propusieron que el ATP aumentaba la constante aparente de oclusión de Rb+.