Ratones transgénicos que sobreexpresan GH poseen una mayor expresión hepática de mediadores de la señal de GH implicados en proliferación celular.

MIQUET JG, SOTELO AI, GONZÁLEZ L, MATOS MN, TURYN D

Capital Federal, Buenos Aires

Congreso; XV Congreso de la Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo (SAEM); 2007

Sociedad argentina de endocrinología y metabolismo

1) Objetivos: La hormona de crecimiento (GH) es un importante regulador del crecimiento posnatal y del metabolismo. Ratones transgénicos que sobreexpresan GH poseen un aumento de peso corporal y del factor de crecimiento símil insulina 1 (IGF-I) circulante. Estos animales presentan hepatomegalia, debido a hipertrofia e hiperplasia, y una alta incidencia de desarrollo de hepatocarcinoma a edades avanzadas. En trabajos anteriores hemos demostrado que la vía JAK2/STAT5 de transducción de la señal de GH se encuentra desensibilizada en hígado de ratones que sobreexpresan GH. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo es evaluar otras vías de señalización de la GH que pudieran estar exacerbadas en el hígado de los ratones transgénicos y que puedan relacionarse con el aumento de la proliferación y supervivencia celular y con el desarrollo tumoral. Los mediadores de la señal analizados son el factor de transcripción STAT3, la tirosina-quinasa c-Src, la quinasa de adhesión focal FAK, la proteína quinasa B (Akt) y el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). 2) Materiales y Métodos: Se utilizaron ratones transgénicos PEPCK-bGH, que sobreexpresan GH de origen bovino bajo el control del promotor del gen de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa. Como controles normales se utilizaron los hermanos de camada no transgénicos. Los animales se inyectaron con una dosis masiva de GH (5 µg/g de peso corporal) o solución fisiológica por vía intraperitoneal y a los 7 minutos se los sacrificó y extrajo el hígado. El tejido se homogeneizó en frío en presencia de un detergente no iónico y de inhibidores de proteasas y fosfatasas. Luego se realizó una centrifugación para descartar el material insoluble y se determinó la concentración de proteínas de la muestra. El contenido proteico y grado de fosforilación de las proteínas de interés se analizó por Western-blotting de los solubilizados hepáticos con anticuerpos específicos contra cada mediador celular. Para el caso de c-Src, se realizó una inmunoprecipitación de los solubilizados hepáticos con un anticuerpo contra esta proteína previo a la separación por SDS-PAGE y detección por Western-blotting. 3) Resultados: El tratamiento con una dosis masiva de GH produjo el aumento en la fosforilación en tirosina de STAT3 en los ratones normales, pero no en los transgénicos. Sin embargo, los ratones transgénicos presentaron niveles de activación basal de esta proteína significativamente mayores que sus controles normales (P < 0,001; n=10). Para las otras proteínas analizadas, el estímulo agudo con GH no produjo un aumento de la fosforilación de las mismas en los ratones normales ni en los transgénicos. Sin embargo, los ratones transgénicos presentaron un aumento del contenido proteico de c-Src, FAK, Akt y EGFR, acompañado de un correspondiente aumento en su activación basal (P < 0.01, n=10). 4) Conclusiones: Los ratones transgénicos que sobreexpresan GH poseen un aumento en la activación basal de STAT3 y mayor expresión hepática de c-Src, FAK, Akt y EGFR. Estas proteínas están involucradas en vías de señalización relacionadas con la proliferación, supervivencia y motilidad celular. En diversos tipos de tumores humanos se ha descrito la sobreexpresión o actividad aberrante de estas proteínas. Por lo tanto, el aumento de dichos mediadores en el hígado de los ratones transgénicos que sobreexpresan GH sugiere que estas vías de transducción de la señal están constitutivamente activadas y podrían estar implicadas en las alteraciones patológicas que presentan estos animales a nivel hepático.