NUEVO MÉTODO DE VISUALIZACIÓN TRIDIMENSIONAL DEL TRACTO AXONAL CÓRTICO ESPINAL A PARTIR DE TEJIDO ENTERO TRANSPARENTADO UTILIZANDO MICROSCOPÍA DE EXCITACIÓN DE 1-FOTON

QUINTA, RAMIRO; PASQUINI, LAURA; PASQUINI, JUANA

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2014

El principal tracto axonal involucrado en la actividad locomotora de los mamíferos se conoce con el nombre de Tracto Córtico Espinal (TCE), cuyos axones se extienden desde la corteza motora (neurona motora superior), atravesando el cerebro hacia el Tallo cerebral (entrecruzamiento axonal), para finalmente alcanzar las diferentes regiones de la medula espinal, contactando (vía interneuronas) con las motoneuronas inferiores. Todo este proceso desencadena el movimiento voluntario. Asimismo, la visualización del TCE es esencial para poder estudiar procesos patológicos como los que se dan en lesiones traumáticas de médula espinal o en esclerosis múltiple, en cuyos casos la integridad estructural de los axones está afectada. Al día de hoy, la mayoría de estos estudios involucran un tratamiento de corte histológico sobre el tejido en cuestión (cerebro, tallo cerebral y médula espinal), presentando el problema de localizar en forma específica las zonas donde el TCE es predominante. Para sortear esta limitación se usó una novedosa técnica que permite transformar el tejido entero en uno totalmente transparente, y de esa manera poder observarlo directamente al microscopio identificando las zonas de interés sin ningún tipo de micro-corte. Sin embargo, la principal desventaja de este procedimiento es la adquisición de las imágenes, ya que se necesita equipamiento costoso y no convencional como lo es la microscopía de excitación de 2-fotones. En este trabajo desarrollamos una nueva metodología en la que marcando el TCE con FluoroRuby en la corteza motora y luego realizando la técnica de transparentado sobre todo el tejido (cerebro y médula espinal); se logró adquirir imágenes del TCE en la profundidad del tejido intacto, seguida de su reconstrucción tridimensional utilizando microscopía confocal de 1-fotón; logrando una alta calidad de resolución igualando o superando las conseguidas utilizando microscopía de excitación de 2-fotones. La metodología presentada en este trabajo es una poderosa herramienta para desarrollar estudios en patologías donde la integridad del TCE está involucrada.