LA P5-ATPASA SPF1P MODIFICA EL ENVEJECIMIENTO DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE.

SARBIA, NICOLÁS; SELLÉS, MARÍA CLARA; CORRADI, GERARDO RAÚL; ADAMO, HUGO PEDRO

CABA

Jornada; Jornadas Con Ciencia 2013; 2013

Secretaría de Extensión Universitaria y Bienestar Estudiantil de FFyB, UBA. Programa Con Ciencia - CENIME

LA P5-ATPASA SPF1P MODIFICA EL ENVEJECIMIENTO DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Sarbia, Nicolás1; Sellés, María Clara1; Corradi, Gerardo R.1 y Adamo Hugo P.1 1 Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. n.sarbia@gmail.com Introducción: La levadura Saccharomyces cerevisiae es un modelo muy utilizado en estudios de envejecimiento celular. El envejecimiento cronológico puede estimarse mediante la pérdida de viabilidad en condiciones no proliferativas y en S. cerevisiae es dependiente de la cantidad de ácido acético producido durante la fermentación. La Spf1p es una ATPasa de tipo P que presuntamente catalizaría el transporte activo de un ion cuya identidad no se conoce todavía. En humanos, mutaciones en la P5-ATPasa ATP13A2 han sido asociadas con formas juveniles de la enfermedad de Parkinson. Objetivo: El objetivo del trabajo ha sido investigar el efecto de Spf1p sobre el envejecimiento de S. cerevisiae. Materiales y métodos: Para ello hemos medido el crecimiento (DO a 600nm) y la viabilidad (cuantificación de unidades formadoras de colonias (UFC)) de cuatro variantes de S. cerevisiae: BA, cepa wild type BY4742 transformada con un vector para la expresión de GFP-Spf1p; BI, cepa wild type BY4742 transformada con un vector para la expresión de GFP-Spf1p-D487N; YA, knock out Spf1p, transformada con un vector para la expresión de GFP-Spf1p; y YI, knock out Spf1p, transformada con un vector para la expresión de GFP-Spf1p-D487N. La mutación D487N afecta el sitio de fosforilación del transportador, inactivándolo. Resultados: Las células YI en medio de cultivo SD conteniendo alta glucosa (2%P/V) fueron las más sensibles al agregado de AcH (35mM), el cual produjo una inhibición del crecimiento del 50%. La restricción calórica (RC) es un mecanismo conocido de aumento de la longevidad. En condiciones de RC (glucosa 0,05%P/V), el AcH tuvo un efecto bifásico. Altas concentraciones (mayores a 85 mM) inhibieron el crecimiento mientras que a concentraciones bajas (35mM) se observó un aumento del crecimiento de todas las variantes, excepto YI. En medios conteniendo alta glucosa la viabilidad de todas las cepas disminuyó al 50% aproximadamente a los 18 días, excepto la de BA cuya viabilidad fue del 50% hasta los 40 días. La condición RC mejoró la viabilidad de BI, no modificó la alta viabilidad de BA y fue menos efectiva en aumentar la viabilidad de YA y YI. A tiempos cortos, el agregado de AcH (30mM) en RC aumentó la viabilidad de BA, BI, y YA, pero disminuyó la de YI. Discusión: Los resultados muestran que las cepas carentes de Spf1p endógena son más sensibles al daño por AcH y responden menos eficientemente a la RC como mecanismo de aumento de la longevidad. En cambio, el aumento de la función de Spf1p aumentaría la tolerancia a la acidificación y promueve un aumento del tiempo de vida de S. cerevisiae. Conclusión: Podemos concluir que Spf1p participa en el proceso de envejecimiento de S. cerevisiae, ejerciendo un efecto favorable sobre la viabilidad y el crecimiento. Futuros experimentos se orientarán a la identificación de los mecanismos moleculares que sustenten el efecto descripto para Spf1p. La importancia de estas investigaciones radica en su potencial aplicación en el campo de la salud humana para el desarrollo de conocimientos que permitan avanzar en el entendimiento de patologías asociadas al envejecimiento, como el Parkinson.