Estudio cinético del desplegado y replegado del dominio catalítico de una ATPasa hipertermófila transportadora de cobre(I)

SANTIAGO MARTINEZ; RODOLFO M. GONZÁLEZ LEBRERO; LUIS M. BREDESTON; JOSÉ M ARGUELLO; F. LUIS GONZÁLEZ FLECHA

Montevideo

Congreso; Segundas Jornadas de +Biofisica; 2013

Seccional Biofisica - Sociedad Uruguaya de Biociencias

<!-- @page { margin: 2cm } P { margin-bottom: 0.21cm } --> La ATPasa hipertermófila transportadora del cobre(I) de Archaeoglobus fulgidus (CopA) es una proteína integral de membrana formada por un dominio catalítico (ATPBD), un dominio de accionamiento, dos dominios de unión a metales y un dominio transmembránico. El dominio catalítico es responsable de la actividad enzimática a 75C, y posee un subdominio de unión a nucleótidos y otro de fosforilación. El objetivo del presente estudio es la caracterización del plegado del ATPBD mediante ensayos en equilibrio y estudios cinéticos. En ambos casos se registró la fluorescencia correspondiente al único residuo triptófano presente en el ATPBD frente a distintas concentración del agente caotrópico cloruro de guanidinio observándose una disminución en la intensidad de fluorescencia como consecuencia de la mayor exposición al solvente producida por la denaturalización. La posterior dilución del agente desnaturalizante resultó en la recuperación de la señal característica de la proteína nativa, indicando la reversibilidad del proceso de desplegado. Los resultados en equilibrio son compatibles con una única transición con un ΔGow=20 kJ/mol. Por el contrario, el análisis de los coeficientes cinéticos aparentes de desplegado y replegado presentan curvaturas en la representación de Chevron que indican la existencia de al menos un intermediario en el proceso de plegado. Con subsidios de UBA y ANPCyT.