Participación de las vías de señalización de MAPK p42/44 y PI3K/Akt en la activación de las acciones biológicas inducidas por el factor estimulante de colonias de granulocitos en células trofoblásticas

VERÓNICA A. FURMENTO; JULIETA MARINO; LEONOR P. ROGUIN

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Previamente determinamos la presencia del receptor para el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) en una línea de células trofoblásticas humanas de primer trimestre (Swan 71). Asimismo, demostramos que el G-CSF produce un aumento de la actividad proteolítica de la metaloproteinasa-2 (MMP-2) y de la secreción del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF). El propósito de este trabajo fue investigar la participación de algunas vías de señalización en la inducción de estas acciones biológicas. En primer lugar, luego de incubar células durante distintos tiempos con 1 µg/ml de G-CSF, estudiamos las cinéticas de fosforilación de la MAPK p42/44 y de Akt mediante ensayos de Western Blot (WB). Los niveles máximos de fosforilación de la MAPK p42/44 (1.86±0.05 veces respecto al control, p menor a 0.001) y de Akt (1.7±0.2, p menor a 0.005) se alcanzaron luego de 60 y 15 minutos de incubación, respectivamente. Como la vía PI3K/Akt está relacionada con la activación de NFkB, decidimos investigar la cinética de degradación de su inhibidor específico (IkB). Ensayos de WB revelaron que los niveles de IkB disminuyen un 52±1% (p menor a 0,001) luego de 16 horas de incubación con 1 µg/ml de G-CSF. Consecuentemente, sobre la base de estos resultados estamos evaluando la translocación nuclear de NFkB. Por otro lado, ensayos preliminares indicaron que luego de preincubar las células con 1 µM de LY 294002 (inhibidor de PI3K/Akt), 0.5 µM de BAY 11-7082 (inhibidor de la quinasa de IkB) y 1 µM de PD 98059 (inhibidor de p42/44), los tres inhibidores bloquean los incrementos en la actividad de la MMP-2 (zimografía) y en los niveles de secreción de VEGF (WB) inducidos por el GCSF. En su conjunto, los resultados obtenidos revelan que el G-CSF activa las vías MAPK p42/44 y PI3K/Akt en células trofoblásticas. Estas cascadas de transducción estarían mediando algunas acciones biológicas estimuladas por la citoquina, tales como el aumento en la actividad de la MMP-2 y en la secreción de VEGF.