REACTOR BASADO EN PEROXIDASA DE SOJA INMOVILIZADA SOBRE UN POLIANFOLITO COMO HERRAMIENTA RÁPIDA PARA LA DISCRIMINACIÓN POR CONTENIDO DE POLIFENOLES.

LISANDRO ROBERTO DENADAY; M. VICTORIA MIRANDA; ROSA M. TORRES SÁNCHEZ; GIANNINA CINQUI; VIVIANA CAMPODALLORTO

Santa Fe

Congreso; VI Congreso Argentino de Química Analítica.; 2011

Universidad Nacional del Litoral

La enzima peroxidasa de soja (SBP) existe en altas concentraciones en la cáscara de la semilla y no había sido empleada con fines analíticos. Se inmovilizó SBP sobre un material polimérico con propiedad de anfolito que presenta elevada capacidad de carga de proteínas. Este polímero posee un punto isoeléctrico de de 8.2, área específica superficial: 0.6 m2 g-1 (por adsorción de N2), área superficial: 365 m2 g-1 (por adsorción de H2O), y Dapp: 64 um. Se adsorbieron 0.1 mg g-1 de SBP, Kd 1.3 x10-8 M y dGºads – 44.92 kJ mol-1. La proteína fue luego fijada con glutaraldehído y se estimó que un 17% de la proteína conservó su actividad. El complejo SBP-polianfolito se mezcló con partículas de sílica de 200 µm de diámetro en una proporción 75:25 para disminuir la resistencia al flujo de solución al ser confinado en un reactor en sistema de flujo. El reactor se empleó como herramienta analítica para determinar polifenoles. Se estudió la respuesta amperométrica a catecol (E: +0.1 V; rango lineal: 10 – 200 uM; sensibilidad 2.9 uCoul mM-1; LoD: 8 uM) y epinefrina (E: -0.2 V; rango lineal: 75 – 300 uM; sensibilidad 3.6 uCoul mM-1; LoD: 67 uM), detectando el producto de oxidación de cada compuesto por reacción con H2O2 (0.2 mM, en carrier) catalizada por SBP. Se estudiaron las restricciones difusionales externas y no se obtuvieron evidencias de restricciones difusionales internas. El reactor permitió discriminar yerba mate según su procedencia. La respuesta de los extractos (expresada como equivalentes de catecol) fue de 5.4 mM y de 3.8 mM para dos muestras provenientes de Misiones, y 6.4 mM para la proveniente de Corrientes. El ESR entre replicados genuinos fue inferior al 6%. El método de Folin-Ciocalteu y el empleo de un biosensor a base de tirosinasa no resultaron adecuados para este fin. Este sistema también permitió discriminar el estado de oxidación de vino tinto sin antioxidantes agregados mediante la determinación del porcentaje de inhibición reversible a la señal de catecol producida por inyección de la muestra. La inhibición producida por vino sometido a añejamiento en condiciones de micro-oxigenación fue del 6%, la inhibición por vino joven fue de 69 % y por vino joven suplementado con oxígeno de 80 %. Existió correlación con la evolución de parámetros enológicos tales como potencial rédox, rH y pH.