Efecto del factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) sobre la actividad de la metaloproteinasa-2 y la secreción de VEGF en una línea de células trofoblásticas

FURMENTO V.A.; MARINO V.J.; ROGUIN, L. P

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica Anual 2010 de la Sociedad Argentina de Fisiología, XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2010

SAIC, SAFIS, SAFE

Aunque las funciones del factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) han sido caracterizadas en células granulocíticas, sus acciones en otros tipos celulares no fueron aún esclarecidas. Se ha demostrado que la placenta es uno de los pocos tejidos no hematopoyéticos que secreta grandes cantidades de G-CSF y expresa receptores para esta citoquina (G-CSFR). Con el propósito de investigar si el G-CSF desempeña un rol biológico en este tejido, utilizamos una línea de células trofoblásticas humanas de primer trimestre (Swan 71). Inicialmente, determinamos la expresión de G-CSFR en esta línea celular mediante ensayos de detección inmunocitoquímica y Western Blot (WB). Luego demostramos que aunque el G-CSF induce la proliferación y sobrevida en líneas granulocíticas, estos efectos no fueron evidentes en células Swan 71. Para estudiar el efecto biológico del G-CSF, se evaluó la actividad de la metaloproteinasa-2 (MMP-2) y la secreción del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) en sobrenadantes de cultivo de células estimuladas con distintas concentraciones de citoquina. Mediante ensayos de zimografía, se observó un aumento de un 35% (p < 0.001) en la actividad de la forma latente de MMP-2 (proMMP-2) en presencia de 100 ng/ml de G-CSF. También demostramos por WB que la misma concentración de G-CSF produjo un incremento en los niveles de VEGF. Puesto que tanto la MMP-2 como el VEGF están relacionados con la invasión trofoblástica, comenzamos a estudiar la participación de vías de transducción activadas en este proceso, como PI3K/Akt. Ensayos de WB de células incubadas durante distintos tiempos con 1 mg/ml de G-CSF, mostraron una inducción en la fosforilación de Akt luego de 5 minutos de incubación. Los resultados revelan la presencia de receptores para G-CSF en células Swan 71 y sugieren que esta citoquina participaría en el proceso de invasión trofoblástica aumentando la secreción de MMP-2 y de VEGF, posiblemente a través de la vía PI3K/Akt.