CD166: un ligando de galectina-8 que media la actividad pro-angiog¨¦nica de la lectina en c¨¦lulas BAEC

L. NUGNES; V. CARDENAS DELGADO; M. FERNANDEZ; C. MARTINEZ; M. TRONCOSO; C. WOLFENSTEIN-TODEL; D. CROCI; G. RABINOVICH; E. MALCHIODI; M. ELOLA

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología, XVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2010

La galectina-8 (Gal-8) se caracteriza por poseer secuencias de amino¨¢cidos consenso y dos dominios de reconocimiento a carbohidratos b-galact¨®sidos. Demostramos previamente que Gal-8 est¨¢ implicada en procesos fisiol¨®gicos como tubulog¨¦nesis y migraci¨®n de c¨¦lulas endoteliales. Son nuestros objetivos: 1) Identificar ligandos para Gal-8 en c¨¦lulas endoteliales BAEC mediante cromatograf¨ªa de afinidad y espectrometr¨ªa de masa; 2) Validar la interacci¨®n de Gal-8 y sus ligandos mediante inmunoprecipitaci¨®n y ¡°Resonancia Plasm¨¢tica de Superficie¡± (SPR); 3) Estudiar los efectos de los glicanos en la interacci¨®n Gal-8/CD166 y 4) Evaluar a CD166 como probable mediador de los efectos de Gal-8. Para ello, a partir de lisados de BAEC y mediante cromatograf¨ªa en AffiGel-Gal-8, digesti¨®n ¡°in gel¡± y espectrometr¨ªa de masa, se demostr¨® que CD166 (ALCAM) interact¨²a con Gal-8. Mediante co-inmunoprecipitaci¨®n, se detect¨® la formaci¨®n de complejos CD166-Gal-8. Mediante SPR, se determin¨® la constante de disociaci¨®n aparente (KD) de 2 ¦ÌM, indicando la especificidad de la uni¨®n Gal-8-CD166. Mediante SPR tambi¨¦n se analiz¨® la dependencia de glicanos en la interacci¨®n Gal-8/CD166: Gal-8 o Gal-8 pre-incubada con sacarosa rindieron afinidad similar a CD166 inmovilizado mediante an¨¢lisis de afinidad en estado estacionario (1,9 x 10-6 M y 1,1 x 10-6 M, respectivamente). Las KDs aparentes obtenidas por an¨¢lisis cin¨¦tico fueron de 2,1 x 10-6 M y 0,58 x 10-6 M, respectivamente. Por lo contrario, la lactosa y el TDG, az¨²cares espec¨ªficos para esta lectina, inhibieron completamente la uni¨®n de Gal-8 a CD166. En cuanto al rol fisiol¨®gico de CD166, BAEC pre-incubadas con anti-CD166 mostraron una disminuci¨®n significativa (~1,5 veces, P<0,05) de la tubulog¨¦nesis inducida por Gal-8. Asimismo, anti-CD166 bloque¨® la actividad migratoria inducida por Gal-8 (~8 veces, P<0,05). En conclusi¨®n, CD166 es un ligando de Gal-8 en BAEC que media al menos parte de la respuesta angiog¨¦nica inducida por la lectina.