Generación de una vacuna “universal” contra el virus de influenza humana utilizando un sistema de liberación particulado que contenga péptidos antigénicos del virus.

ALVAREZ PAULA; FLEISCHMANN, JUANA SOFÍA; MATTION, NORA

2008-09-20/2008-11-05

Química

Salud humana

El proyecto involucra, inicialmente, el desarrollo de un sistema de liberación particulado (utilizando los sistemas desarrollados por la empresa DHACAM S.R.L) que contenga un péptido de 24 aminoácidos correspondiente a la porción extra-citoplasmática de la proteína Matrix 2 (M2) del virus de Influenza humana (sintetizado por CEVAN). Para realizar este proyecto contamos con  numerosos sistemas particulados propiedad de la empresa  (nanoesferas, liposomas, etc), cuya inocuidad ha sido demostrada en humanos. Se propone inicialmente ensayar la región extracitoplasmática de la proteína M2 ya que numerosos trabajos han demostrado que la inmunización con este péptido, denominado M2e, conlleva a una respuesta inmune protectora contra el virus de influenza (Fiers, 1999; Mozdzanowska, 2003; Fan J, Vaccine 2004; Jiménez GS, 2007).  Además, dado que este péptido se encuentra altamente conservado entre las distintas cepas del virus de influenza tipo A, la inmunización con el mismo  genera, en la mayoría de los casos, una respuesta inmune cross-protectora. La intención del proyecto es desarrollar actividades para llegar a demostrar si la respuesta inmunológica “in vivo” al péptido M2e, cuando está adsorbido en un sistema de liberación, es mejor a la respuesta inmunológica  contra el péptido M2e “perse”. Metodología: Inicialmente se ensayarán distintos sistemas particulados a fin de evaluar tanto su capacidad de adsober el péptido como la cinética de liberación del mismo a la fase soluble. De esta manera se seleccionarán aquellos sistemas que presenten un comportamiento “in vitro” que permita suponer “a priori” la generación de una óptima respuesta inmune “in vivo”, es decir, que adsorban el péptido eficientemente y lo liberen a una velocidad  fisiológica adecuada para la generación de esta respuesta. Para realizar estos estudios se simulará “in vitro” la difusión a través de membranas biológicas utilizando membranas de diálisis de poro adecuado (de manera tal que solamente permitan difundir el péptido libre). Se analizará la liberación del péptido del sistema graficando la concentración de péptido libre (por absorción de la luz en un espectrofotómetro a 320nm) en función del tiempo. Una vez seleccionado el sistema, se ensayará su inocuidad en animales de laboratorio y  se evaluará su capacidad inmunogénica para ser utilizado como vacuna contra el virus de Influenza humana. Se analizarán: distintas dosis de inmunógeno, adyuvantes y vías de inoculación. Así también se realizarán ensayos de desafío con distintas cepas de influenza a fin de determinar la capacidad protectiva de las formulaciones desarrolladas.