INVESTIGADORES
CHIRDO Fernando Gabriel
congresos y reuniones científicas
Título:
Generación de plataformas analíticas para la certificación de productos libres de gluten
Autor/es:
DOÑA V; ZAIDMAN V; URRUTIA M; GOLDBAUM F; CHIRDO F
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; 2do Simposio Latinoamericano de Enfermedad Celíaca; 2009
Institución organizadora:
2do Simposio Latinoamericano de Enfermedad Celíaca
Resumen:
Introducción: En enfermedad celíaca, la dieta
libre de gluten es el único tratamiento efectivo. Aunque no ha sido posible
identificar en forma inequívoca los niveles máximos tolerables, el empleo de métodos
de alta capacidad de detección para la certificación de alimentos libres de
gluten es fundamental para brindar mayor seguridad a los pacientes. Diversas
interferencias técnicas afectan la cuantificación de prolaminas en muy bajos
niveles y dificultan la obtención de resultados confiables.
Objetivo:
Generar nuevas
plataformas analíticas de alto poder de detección para la certificación de productos
libres de gluten.
Materiales
y Métodos: Desarrollos
previos nos permitieron contar con una biblioteca de expresión en fagos de
fragmentos VHHs de Llama. De allí, se seleccionaron los clones más adecuados,
que también fueron producidos en forma recombinante. Por otro lado, se optimizó
un ensayo de amplificación combinado (Immuno-PCR) empleando tanto anticuerpos
convencionales como fragmentos VHHs.
Resultados:
Se obtuvo una
biblioteca de fragmentos VHH de Llama específicos de gliadinas, de la cual se
seleccionaron los clones con mayor estabilidad fisicoquímica para el desarrollo de ensayos cuantitativos. El ELISA
de captura empleando el clon VHH26 tiene un límite de detección de 3,5 ng gliadinas/ml
(0,015 ppm) para el fago y 6 ng/ml (0,025 ppm) para el fragmento soluble El uso
de fragmentos estables en condiciones desnaturalizantes permitió obtener un
ensayo funcional en presencia de una concentración final de 15% de etanol. Basado
en un ensayo de captura se optimizó un sistema de amplificación empleando PCR
en tiempo real (Inmuno-PCR). Usando los pares 1B4/2A1 se obtuvo una significativa
amplificación de señal (0,05 ng/ml, 0,001 ppm) aumentando 20 veces la
detección. Mientras que con el VHH26 soluble se obtuvo un aumento de 30 veces en
la detección (0,2 ng/ml, 0,0008 ppm). Los ensayos fueron
evaluados frente a un panel de muestras comerciales mostrando alta eficiencia
analítica y superior detectabilidad a los ensayos en uso.
Conclusión: Se generaron varias
plataformas analíticas con mayor capacidad de detección que los métodos
actualmente en uso para la certificación de los productos libres de gluten.