INTEC   05402
INSTITUTO DE DESARROLLO TECNOLOGICO PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estabilidad Estructural de Enzimas Lipasa Anclada en la Superficie de una Resina Ionica
Autor/es:
S. COLLINS, M. L. FERREIRA
Lugar:
La Plata
Reunión:
Jornada; IV Encuentro de Física y Química de Superficies; 2009
Resumen:
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Las enzimas lipasas
del género Rhizomucor meihei presentan
una alto desempeño catalítico en reacciones de interés industrial, tales como
la síntesis de lípidos estructurados y la resolución de moléculas quirales
mediante esterificación enantioselectiva [1, 2]. Sin embargo, para poder ser
reutilizadas, las enzimas deben ser inmovilizadas mediante su unión a un
soporte. Este proceso permite una mejora significativa aplicabilidad
tecnológica del biocatalizador, lo que hace posible su empleo en la producción
industrial. No obstante, también presenta dificultades de caracterización de su
estructura, particularmente la disponibilidad del centro activo.
En este trabajo se investigó
comparativamente la estabilidad térmica, es decir la resistencia a la
desnaturalización, de la enzima lipasa Rhizomucor
meihei pura en forma de gel- en contraste con una inmovilizada sobre una
resina de intercambio aniónica (polivinilbenceno). Los cambios en la estructura
secundaria de la enzima se monitorearon en forma continua mediante espectroscopia
infrarrojo in-situ en modo de reflectancia total atenuada (ATR-FTIR) a través
de lo modo vibracional Amida I (1700-1600 cm-1). Para mejorar la
detección espectroscópica de los cambio estructurales, se realizó un
intercambio isotópico en la enzima mediante una incubación in-situ durante 16
hs en un exceso de agua deuterada.
Los resultados indicaron que la enzima pura se desnaturaliza formando
agregados de lámina beta (amida I`: 1621 y 1680 cm-1) [3]. El
desplegado de la proteína se inicia a los 70ºC y se torna irreversible al ser expuesta
durante más de 20 min a 90ºC. La enzima soportada presentó una velocidad de
desnaturalización a 90ºC comparable a la de la enzima pura, lo cual es indicio
de que su estructura secundaria no ha sido modificada sustancialmente al se
anclada a la superficie del soporte sólido.