. LA INFECCIÓN DE ASTROCITOS POR TRYPANOSOMA CRUZI ES CITOPROTECTORA Y DISMINUYE LA MUERTE BYSTANDER TRAS LA SOBRE-INFECCIÓN POR HIV

JM URQUIZA, DS OJEDA, MS LEGUIZAMON, J BURGOS, JF QUARLERI.

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

HIV induce elevados niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) intracelular que promueven alteración en la dinámica mitocondrial. La desregulación de tal dinámica podría generar un ciclo vicioso de generación de ROS y daño mitocondrial capaz de dañar la viabilidad celular. El reciclaje selectivo de mitocondrias dañadas es esencial en el mantenimiento mitocondrial y la homeostasis celular. Se desconoce si la infección por HIV de células de la astroglia requiere de un rápido recambio de mitocondrias dañadas que contribuyan a su persistencia. Determinar si la resistencia al efecto citopático en astrocitos infectados con HIV-1 está asociada a la degradación de mitocondrias dañadas. Se han empleado dos clones moleculares de HIV-1 (NL43-DsRed y NL43-GFP) para infectar 4 líneas celulares de astroglioma humanas U373, U87 y sus modificaciones para la expresión de los receptores CD4 y CXCR4. Análisis por citometría de flujo (FACS Canto, BD) permitieron monitorear la eficiencia de infección por HIV-1 y evaluar los niveles de ROS (DCFDA), el potencial de membrana mitocondrial ΔΨm (DiOC6) y los niveles de apoptosis (Caspasas 3 & 7 y Anexina V). Todas las mediciones fueron realizadas simultáneamente a los 3 dpi, tanto en células infectadas por HIV (DsRed+, o GFP+) como en ?vecinas? no infectadas. La fragmentación mitocondrial y mitofagia fueron evaluadas en células transfectadas con LC3-DsRed y luego infectadas con el clon NL43-GFP. Paralelamente se analizó por microscopía de fluorescencia (Eclipse Ti-E, Nikon) la morfología y localización de las mitocondrias (Mitotracker). El análisis estadístico se realizó con la prueba t-Student. La producción de ROS fue significativamente mayor en células infectadas comparadas con células vecinas no infectadas (30 % vs. 5%; p