Estudio de la oligomerización de la nucleósido difosfato quinasa 1 de Trypanosoma cruzi.

CHANTAL REIGADA; ARTURO GOMEZ BARROSO; CARLOS F. AGUILAR; FABIO DIGIROLAMO; MELISA MARTINEZ SAYÉ; MARIA M. CÁMARA; CLAUDIO A. PEREIRA; MARIANA R. MIRANDA

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2013

Sociedad Argentina de Protozoología.

Las nucleósido difosfato quinasas (NDPK) son enzimas involucradas en la homeostasis intracelular de nucleótidos. En Trypanosoma cruzi, TcNDPK1 es una enzima multifuncional por poseer, además de la actividad quinasa, la capacidad de unirse y degradar ácidos nucleicos, ser una enzima de secreción y estar involucrada en la resistencia a drogas tripanocidas. Asimismo, TcNDPK1 es hexamérica y cuando es fusionada con una proteína dimerizante como la GFP produce gránulos cuyos volumenes ocupan gran parte del cuerpo celular. En el presente trabajo avanzamos en el estudio de la formación de dichos gránulos y determinamos que este fenómeno es específico a TcNDPK1 puesto que otras proteínas multiméricas como la glutamato deshidrogenasa no genera estas estructuras al fusionarse con GFP. Estos resultados sugieren que la NDPK podría estar oligomerizándose, un proceso que ocurriría naturalmente y que se ve favorecido por la fusión al minimizar las distancias intermoleculares. Determinamos que mutantes de la enzima que involucran la actividad catalítica no afectan la oligomerización, mientras que mutaciones que intervienen en la formación del hexámero si lo hacen. Adicionalmente, estudios realizados sobre la estructura cristalina de TcNDPK1 demuestran que se disponeordenadamente en una conformación nunca antes observada, de hélices levógiras formadas por tetrámeros de hexámeros apilados entre sí. Estos resultados sugieren que TcNDPK1 podría ensamblarse in vivo y que sus múltiples funciones podrían estar reguladas por un mecanismo de polimerización-depolimerización.