INVESTIGADORES
CULZONI Maria Julia
congresos y reuniones científicas
Título:
Modelado de datos de segundo orden generados a partir de cromatografía líquida de alta resolución con detección de fluorescencia de barrido rápido para la determinación de 7 fluoroquinolonas en agua residual. Exaltación de fluorescencia por agregado de Yt
Autor/es:
ALCARAZ; MONTEMURRO; CULZONI; GOICOECHEA
Reunión:
Congreso; 3er Congreso Uruguayo de Química Analítica; 2014
Resumen:
En este trabajo se presenta el desarrollo de un
método por cromatografía liquida de alta resolución con detección de
fluorescencia de barrido rápido combinado con resolución multivariada de curvas
extendida mediante cuadrados mínimos alternantes (MCR-ALS extendido) para la
cuantificación de 7 fluoroquinolonas en presencia de itrio (Y+3). El Y+3 en solución no presenta
características fluorescentes, pero se ha demostrado que aumenta
significativamente la fluorescencia nativa de ciertas fluoroquinolonas mediante
la formación de complejos de coordinación. Las
fluoroquinolonas utilizadas en este trabajo son ciprofloxacina (CPF),
enrofloxacina (ENF), norfloxacina (NRF), ofloxacina (OFL), enoxacina (ENO),
flumequina (FLU), sarafloxacina (SRF), danofloxacina (DNF) y difloxacina (DIF);
todas ellas presentan fluorescencia nativa. La utilización de Y+3
incrementa la fluorescencia de estos analitos, disminuyendo así los límites de
detección y cuantificación, llegando a límites comparables con métodos de mayor
complejidad. En primer lugar, se evaluó
espectrofluorimétricamente el efecto del Y+3 en la exaltación de la
señal fluorescente de las fluoroquinolonas de interés 3, en un rango
de pH de 4 a 9, como así también posibles corrimientos de los máximos de
emisión y excitación de fluorescencia. La condición óptima fue aquella que generó
tanto la máxima intensidad de fluorescencia para todos los analitos, como un
corrimiento espectral que permita diferenciar aquellas fluoroquinolonas que presentan
el mismo espectro (NRF, CPF y ENF por un lado, y SRF y DIF, por el otro). A
continuación, se procedió a optimizar el sistema cromatográfico de manera tal
de obtener la máxima resolución cromatográfica entre los analitos que presentan
iguales espectros de emisión. El método cromatográfico se desarrolló en modo
isocrático, utilizando una fase móvil de buffer Tris (20 mmol/L, pH=4, adicionado con Y+3 en una
concentración de 1x10?4 mol L?1) /acetonitrilo/metanol. .
Se trabajó a un flujo de 2.20 mL min?1 y a una temperatura de horno
de columna de 40ºC. Se utilizó una columna Zorbax Eclipse C18 4.6 × 75 mm y 3.5
µm de tamaño de poro. A cada tiempo cromatográfico se registró el espectro de
emisión en el rango entre 340 nm y 510 nm a una longitud de onda de excitación
de 280 nm. Para la calibración, se prepararon estándares de
cada una de las fluoroquinolonas en 5 niveles de concentración entre 0 y 90 ppb
por triplicado, y para la validación, 12 mezclas de estándares de las 7
fluoroquinolonas en agua MilliQ por duplicado. Todas la muestras se prepararon
transfiriendo cantidades adecuadas de cada analito a matraces de 5 mL, agregando
5 µL de Y+3 0.1 mol L?1 y llevando a volumen con agua MilliQ.
Para cada muestra, se registraron matrices de tiempo-emisión de fluorescencia, generando
datos de segundo orden que luego se analizaron mediante MCR-ALS extendido. El método desarrollado permitió cuantificar los analitos
de interés en muestras de agua residual, en presencia de interferencias no
modeladas, obteniendo límites de detección y cuantificación en el orden de ppt,
sin necesidad de preconcentración.