?CITOPROTECCIÓN Y CITOTOXICIDAD EN CÉLULAS IEC-18 DE LA LEVADURA PROBIÓTICA Kluyveromyces marxianus VM004?

CENTOMO ANTONELLA MARÍA; ROSSI YANINA ESTEFANÍA; DÍAZ VERGARA LADISLAO IVÁN; BOHL LUCIANA PAOLA; PORPORATTO CARINA; CAVAGLIERI LILIA RENEÉ,; MARIANA ANGÉLICA MONTENEGRO

Villa María

Jornada; II JORNADA NACIONAL DE AGROALIMENTOS Y SUSTENTABILIDAD; 2021

Universidad Nacional Villa María

En la última década se ha producido, por parte de los consumidores, un aumento en la demanda de alimentos con potenciales efectos benéficos sobre la salud. En este contexto, la industria alimentaria se ha centrado en desarrollar nuevos productos alimenticios que contengan ingredientes que promuevan la salud. Por lo tanto, los agentes bioactivos tales como probióticos, prebióticos y antioxidantes, entre otros se consideran ingredientes potenciales y seguros para satisfacer la demanda del mercado mundial de nuevos productos funcionales. En este trabajo, se evaluó la citotoxicidad y citoprotección de la levadura probiótica nativa de lactosuero Kluyveromyces marxianus VM004 con el objetivo de evaluar su potencial como ingrediente funcional. Se observó la morfología de las células en el microscopio. Para ambos ensayos se sembraron células normales de epitelio intestinal murino de ratas (IEC-18) en placas de 24 pocillos (2x105 células/pocillo). Para evaluar la citotoxicidad se trabajó con concentraciones de levadura entre 5x104 y 8x105 lev/mL y se determinó la viabilidad con el ensayo de exclusión de células muertas con trypan blue (TB), utilizando la cámara de Neubauer para el recuento de las células viables. El efecto citotóxico se expresó como el porcentaje de viabilidad respecto al control.El ensayo de citoprotección de las levaduras fue evaluado frente al compuesto menadiona (MEN), inductor del estrés oxidativo. Las células fueron tratadas con MEN en el rango de concentraciones de 0,8 a 26 uM por 24h y para el ensayo de citoprotección fue seleccionada la concentración 7uM (mostrando entre 47 y 67% viabilidad). Se realizaron dos experimentos, en el primero, las células IEC-18 fueron pre-tratadas con levaduras en el rango de concentraciones entre 1x104 y 5x105 lev/mL por 24h y luego expuestas a MEN (7uM) por 24h (pre-tratamiento). En el segundo, las IEC-18 fueron incubadas con levaduras (1x104 y 3x104 lev/mL) junto a MEN (7uM) por 24h (co-tratamiento). La viabilidad de las células fue evaluada con el ensayo de exclusión con TB. En cuanto a citotoxicidad, la viabilidad de las IEC-18 no mostró diferencias significativas con el control a concentraciones menores o iguales a 2x105 lev/mL, sin embargo a partir de 4x105 lev/mL, se observó una disminución de la viabilidad celular obteniendo valores de 68% y 63% cuando la concentración de levaduras fue 4x105 y 8x105 lev/mL respectivamente. A partir de la observación de las células en el microscopio, se definió la concentración máxima no citotóxica (CMNC).Con respecto a la citoprotección, los pre-tratamientos no mostraron diferencia significativa con las IEC-18 tratadas con MEN, siendo la viabilidad entre 49 y 53%. Esto revela que los pre-tratamientos no tuvieron efecto citoprotector frente a MEN. Sin embargo, los co-tratamientos mostraron diferencia significativa frente al tratamiento con MEN, presentando viabilidades del 99 y 96%, revelando un marcado efecto citoprotector de las levaduras en co-tratamiento frente al agente estresor MEN (7uM), en un intervalo de concentraciones en los cuales la levadura no presentó citotoxicidad. La levadura probiótica podría considerarse un potencial ingrediente para alimentos funcionales, ya que ejerce citoprotección frente a MEN a las concentraciones que no mostraron citotoxicidad in vitro para células IEC-18.