La entrada de virus Dengue en células humanas

ANA C CARRO; ELIANA G ACOSTA; ELSA B DAMONTE

Villa Giardino, Córdoba

Jornada; XXX Reunión Científica Anual; 2010

Sociedad Argentina de Virología

El virus dengue (DENV) es un arbovirus de la familia Flaviviridae que puede causar en el hombre una enfermedad febril aguda relativamente benigna y autolimitada, la fiebre de dengue, o progresar a las formas más severas conocidas como dengue hemorrágico y síndrome de shock, con alta tasa de mortalidad. Por la reemergencia del virus en las últimas decadas esta infección representa la  enfermedad transmitida por artrópodos con mayor prevalencia en humanos. La entrada de DENV a la célula ha comenzado a estudiarse en los últimos años y se ha demostrado en ciertas líneas celulares la utilización de rutas alternativas de endocitosis según el serotipo viral y la célula huésped. En este trabajo se investigó el efecto de compuestos inhibidores de vía endocítica sobre la multiplicación de DENV tipo 2 en células humanas. Se utilizaron células K562 (línea de eritroleucemia humana), U937 (mielomonocitos) y A549 (de carcinoma de epitelio pulmonar). La citotoxicidad de los compuestos a utilizar se evaluó utilizando el método de MTT o de azul trypan. El efecto de los compuestos sobre la producción de virus se examinó mediante ensayos de inhibición de rendimiento viral. Para ello, las células se pretrataron con distintas concentraciones no citotóxicas de cada compuesto y luego se infectaron con la cepa New Guinea C de DENV-2 a una multiplicidad de infección de 1 UFP/célula. Luego de la adsorción de los viriones en ausencia o presencia de los compuestos, se retiraron los inóculos y los cultivos se cubrieron con medio sin droga. A las 48 horas post-infección se cuantificó la producción viral por el método de formación de placas en células Vero. El tratamiento con el compuesto lisosomotrópico NH4Cl que provoca un incremento de pH en el interior de los endosomas, produjo una inhibición del rendimiento viral entre el 90 y el 99% en la máxima concentración ensayada (50mM). Asimismo, se realizó un tratamiento con el compuesto clorpromazina (CZ), inhibidor de la endocitosis mediada por clatrina que produjo una inhibición de entre el 90 y el 99% en el rendimiento viral en las mayores concentraciones ensayadas para cada tipo celular, en el rango 25-50µM. Por otro lado, el tratamiento con metil-beta-ciclodextrina (MbCD), inhibidor de la endocitosis mediada por caveolas, no afectó la replicación de DENV-2 en el rango de concentraciones utilizado (0,625-5 mM). A pesar de no afectar la entrada del virus, MbCD ejerció un fuerte efecto virucida destruyendo totalmente la capacidad infectiva de una suspensión de DENV-2 luego de una hora de incubación a 37°C, en tanto que NH4Cl y CZ no mostraron acción inactivante. Los resultados sugieren que DENV-2 utiliza la vía endocítica dependiente de pH y mediada por clatrina como principal mecanismo de entrada a células humanas tanto epiteliales como de origen linfoideo.