Knockdown de la RNA binding protein TbRRM1 de Trypanosoma brucei induce arresto del ciclo celular y muerte celular programada.

ORTIZ GE; MORETTI G; SÁNCHEZ DO

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias.; 2011

TbRRM1 es una ?RNA binding protein? perteneciente a la familia de las ?SR related?. Distintos miembros de esta familia de proteínas desempeñan diversas funciones en el metabolismo de los ARNm. Entre ellas, el transporte, control de calidad, estabilización y regulación de la traducción de mRNAs, así como en la regulación del ?splicing? de pre-mRNAs. Para comenzar a estudiar la función de TbRRM1 construimos dos líneas celulares que expresan, en forma inducible, un RNAi dirigido contra la región 5?UTR o la región codificante del gen, respectivamente. La inducción del RNAi en ambas líneas celulares arrestó el crecimiento de los parásitos a las 24 hs, hecho que fue acompañado de la presencia de un alto porcentaje de células que presentaban un alargamiento en la región posterior, compatible con un fenotipo ?nozzle?. Análisis morfométricos y del número de núcleos y kinetoplastos presentes por célula, confirmaron este fenotipo. El fenotipo ?nozzle? ha sido reportado en formas procíclicas de T. brucei y está asociado a células arrestadas en la fase G1/S del ciclo celular. Llamativamente, 48-72 hs post-inducción del RNAi, los parásitos con fenotipo ?Nozzle? se redondearon, presentando un perfil del contenido de DNA característico de células en apoptosis. Análisis por citometría de flujo de parásitos marcados con anexina V y yoduro de propidio, confirmaron que más del 69% presentaban un fenotipo apoptótico a las 72 hs post-inducción. Las características estructurales de TbRRM1 y su localización principalmente en ?speckles? nucleares, sugieren un posible rol de la misma en el metabolismo del ARNm. Con el objeto de estudiar si TbRRM1 esta involucrada en la regulación de la expresión de genes relacionados con los fenotipos observados, analizamos por Microarrays la abundancia relativa de ARNm en células depletadas y no depletadas de TbRRM1. El análisis de los Microarrays mostró que la depleción de la proteína induce una reducción significativa de los niveles de 69 mRNAs. Interesantemente, también se observó el incremento de los niveles de 35 mRNAs. Actualmente estamos evaluando por Real Time PCR un grupo de estos genes para confirmar estos resultados.