Degradación de Aflatoxina B1 por extractos de Bacillus S. y Trametes V, seguimiento de reacción por HPLC y detección de productos por LC-MS2

CABEZUDO, IGNACIO; ROMANINI, DIANA; BOSCHETTI, CARLOS; BRAR, SATINDER KAUR

Río cuarto

Congreso; 9º Congreso Argentino Química Analítica; 2017

Universidad Nacional de Río Cuarto

Lasmicotoxinas son metabolitos secundarios (de PM por debajo de 700), producidospor hongosfilamentosos. Han asumidoimportancia debido a sus efectos no deseados en humanos, aves de corral  y ganado.  La  degradación biológica  de  aflatoxina B1  (AFB1),  un potente carcinógeno  se puedelograr por medio de microorganismos. Investigamos la degradación de AFB1 porextractos libres de célula de Bacillus subtilis (Bs) ricos en lipasa, y de Trametesversicolor (Tv) ricos en lacasa. La toxina  AFB1  se disolvió  en  MeOH (100  ppm)  y luego  una  pequeña alícuota se  agregó a  los extractos libres de célulapara lograr una concentración final de 2 ppm. Realizamos un seguimiento de ladegradación de AFB1 en el tiempo (0-96 h) mediante determinaciones de suconcentración por HPLC, utilizando una columna C18 y detección por DAD a una λ= 365 nm. La cuantificación se realizó frente a una curva de calibración depatrones de la toxina. En presencia de extractos de Bs, la concentración deAFB1 disminuyó progresivamente y a las 96 h, un 84,6% de la misma estaba degradada.En contraste, hubo una menor reducción de AFB1 en el extracto de Tv, 42,1%, enel mismo  período.  En  elcaso  del experimento  control (AFB1  en agua  destilada)  no hubo reducción significativa. Para indagar sobre los productos de degradación,las muestras se caracterizaron por LC-MS2, donde la ionización en modo positivopermitió una buena visualización de los productos, acompañados  siempre de  un  protón. La búsqueda  de  compuestos se  basó  en referencias  de literatura. Laidentidad de iones padre fue confirmada por fragmentación en iones hijos,utilizando la  información  disponible. Al  menos siete  productos de  degradación  de AFB1 (m/z  =  313) previamente reportados se formaron ennuestros extractos, seis de ellos en extractos de Bs y tres en  extractos de Tv,  siendo  sus m/z: 293,  295,  327, 339  (Bs),  349  (Tv)  y 311,  325  (ambos microorganismos). Concluimos que esposible la degradación de AFB1 por cultivos líquidos de Bs y Tv. La toxicidad fuereducida y se estudiaron los interesantes productos de degradación, que en uninforme anterior, mostraron  una toxicidad  muy reducida  en  comparación con  AFB1.  Las enzimas  extracelulares, tales  como lipasa y  lacasa,  podrían ser  responsables  del proceso  de  degradación en Bs y Tv, respectivamente.