COMPARACIÓN DE 2 TÉCNICAS DE ESPECTROMETRIA DE MASAS EN TANDEM (MS2 Y MS3) PARA LA DETERMINACION DE ANTIRETROVIRALES EN PLASMA HUMANO

FERNANDO A. IÑON; GABRIEL A. HUNZICKER; MATIAS N. BALDO; BERTONCINI, CARLOS W.; DIEGO A. GRASSI

Rosario

Congreso; III CONGRESO ARGENTINO DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS; 2016

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masas

El incremento en la sensibilidad de los métodos de cuantificación de fármacos y metabolitos en fluidos biológicos es uno de los objetivos analíticos más desafiantes que enfrenta hoy la espectrometría de masas. Las matrices biológicas son altamente complejas y los niveles de detección requeridos en estudios de farmacología clínica son extremadamente bajos. Debido a esto, la técnica analítica de referencia es LC-MS/MS, ya que es capaz de proveer mayor sensibilidad y especificad que las técnicas tradicionales de HPLC acoplado a detectores de absorción UV o Fluorescencia. En el análisis cuantitativo por espectrometría de masas, el incremento en el número de fragmentaciones secuenciales a las que se somete un analito, permite, en teoría, obtener una mejora en el desempeño analítico en cuanto a cifras de mérito se refiere, principalmente en especificidad y sensibilidad analítica1. Con el objetivo de evaluar críticamente la mejora en el desempeño analítico de un incremento en el número de fragmentaciones, en el presente trabajo comparamos una técnica de LC-MS/MS con otra de LC-MS/MS/MS para la determinación de antiretrovirales (ARVs) en plasma humano. A tal fin se desarrollaron técnicas bioanalíticas para cuantificar plasmas enriquecidos con 3 ARVs usados comúnmente en el tratamiento de HIV en humanos2: Lamivudina (3TC), Nevirapina (NVP) y Zidovudina (ZDV), utilizando Emtricitabina (FTC) como estándar interno. Las determinaciones fueron realizadas en un instrumento híbrido tipo triple cuadrupolo (QqLIT) de estructura similar a un triple cuadrupolo tradicional (QqQ) pero en el cual el tercer cuadrupolo puede funcionar, adicionalmente, como una trampa lineal de iones. Esto brinda al sistema la posibilidad de realizar experimentos de doble (MS2) o triple fragmentación (MS3) al ser operado en modo monitoreo de reacciones múltiples (MRM) alternativamente como un MS/MS o como un MS/MS/MS.Para cada analito en estudio se analizó la especificidad contra componentes normales de la matriz biológica, contra los otros analitos y contra el estándar interno, así como figuras de mérito como linealidad, sensibilidad, sensibilidad analítica y límite de detección (LOD). Ambas metodologías presentaron excelentes cifras de mérito, la metodología MS/MS/MS presentó una mejor especificidad