Caracterización del daño del injerto intestinal en un modelo experimental de donante cadavérico en ratas

VECCHIO, L; ROMANIN, D; SAVES, J.; STRINGA, P; RAIMONDI, J; LAUSADA, N; RUMBO, M

Mérida

Congreso; XXV Congreso Latinoamericano y del Caribe de Trasplante; 2019

Sociedad de Transplante de America Latina y el Caribe

Introducción: El trasplante intestinal experimental (TxI) en ratas esuna herramienta ampliamente utilizada tanto para el estudio de lainjuria por isquemia reperfusión y el rechazo. En la mayoría de losprotocolos de investigación se utilizan donantes vivos. Con el ob-jetivo de generar un modelo más extrapolable a la realidad clínica;nuestro objetivo es caracterizar un protocolo de muerte encefálica(ME) que sirva para analizar el impacto de los procesos biológicosasociados al donante cadavérico en el TxI. Material y métodos:Se utilizaron ratas Wistar entre 280-330 g, divididas en dos grupos,muerte encefálica (ME n = 5) y control con ventilación asistida sinME (VA n = 5). La inducción anestésica fue con isoflurano al 5% y elmantenimiento inicialmente con máscara y luego vía endotraquealal 2/2.5% con VA (50RPM-2.5VT). Se colocaron vías arterial y ve-nosa para controlar la presión arterial y manejar la fluidoterapia. Enel grupo ME, a través de una trepanación de cráneo, se colocó uncatéter Fogarty 4F en el espacio subdural y se insufló el balón a unflujo de 1 mL/h. Una vez que se observó el reflejo de Cushing, serealizó el diagnóstico de clínico de ME mediante el test de apnea.La rata permaneció bajo ME durante dos horas, manejando la TAMentre 70 y 140 mmHg. El grupo control permaneció con VA durantela misma cantidad de tiempo. Posteriormente, el injerto intestinal selavó con solución salina a 4 oC y se tomaron muestras histológicaspara tinciones H&E y Alcian Blue e inmunohistoquímica para linfo-citos CD3. El daño histológico se analizó con la escala Park-Chiu yutilizando Image J® se calculó el índice cripta vellosidad (IVC), y elconteo de células de GobletyCD3. Resultados: El daño histológicogeneral y focal fue mayor en el grupo ME respecto a VA (0.8 ± 0.8versus 0.2 ± 0.4; p = 0.1160) y (0.8 ± 0.83 versus 1.6 ± 0.54; p =0.0731), respectivamente. El número de células de Goblet por cada25 vellosidades fue menor en el grupo ME (531 ± 103.5) con res-pecto a VA (763.8 ± 120.1; p = 0.0317). El IVC dio como resultadoME = 2.65 ± 0.65 y VA = 3.06 ± 0.65 (p = 0.002). El perfil inflamato-rio mostró un infiltrado de linfocitos CD3 por campo de observaciónsignificativamente mayor el grupo ME (8.1 ± 3.16 versus VA = 4.77± 1.72 p = 0.0159). Conclusiones: En los parámetros histológicosse puede observar que la ME tiene un efecto negativo tanto a nivelestructural y funcional como en el plano inflamatorio representadoesencialmente por el IVC, el conteo de células de Goblet y el au-mento en el infiltrado de linfocitos. Estos resultados muestran quepasadas las dos horas de ME, se puede obtener un injerto viablepara el trasplante y con un claro compromiso inmunológico, lo quehace a este modelo indicado para estudios de injuria por isquemiareperfusión y rechazo, como también diversos estudios inmunológi-cos asociados al trasplante de intestino.