UN ?LINKER? FLEXIBLE Y CONSERVADO POTENCIA LA AFINIDAD DEL DOMINIO VIRAL INTRINSECAMENTE DESORDENADO ade1a(36-146) POR SU BLANCO RB.

GONZALEZ FOUTEL N; GLAVINA, J.; SANCHEZ, IE; DE PRAT-GAY, G.; CHEMES L.B.

Santiago del Estero

Congreso; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2015

Virus patogénicos como el Adenovirus, HPV y SV40 poseen proteínas capaces de interactuar con el supresor de tumores retinoblastoma (Rb), regulador central del ciclo celular eucariota. Tales interacciones están mediadas por los mismos sitios principales con los que Rb une sus blancos endógenos: el sitio de unión al factor de transcripción E2F y el sitio LxCxE. Estos virus hacen mímica de motivos lineales de interacción presentes en regiones intrínsecamente desordenadas, permitiendo una interferencia eficaz con la red celular.La oncoproteína viral E1A de Adenovirus (AdE1A) une a Rb a través de dos motivos necesarios para desplazar a E2F, ubicados en los dominios ?CR1? (E2F-mimic) y ?CR2? (LxCxE) y separados por un ?linker? de 70 residuos. Dado el escaso conocimiento mecanístico y estructural acerca de estas interacciones, nos propusimos caracterizar a AdE1A (CR1-CR2) y su interacción con Rb.Para ello, expresamos en forma recombinante el fragmento AdE1A(36-146) que contiene CR1 y CR2, con rendimiento final: 8mg/litro y pureza ≥95%. Técnicas de SEC/SLS y dicroísmo circular revelaron que AdE1A(36-146) es monómero de radio hidrodinámico extendido y naturaleza intrínsecamente desordenada. Ensayos de interacción entre AdE1A(36-146) y el dominio central de Rb (RbAB) indicaron la formación de un complejo 1:1 acompañado de una compactación del radio hidrodinámico de E1A. Mediciones espectroscópicas en solución revelaron que la afinidad y tiempo de vida del complejo AdE1A(36-146):Rb, que contiene a ambos sitios de unión (KD = 20 pM) se encuentra potenciada 7000 veces por sobre la de los sitios individuales (KD=140nM). Un análisis cuantitativo basado en teoría de polímeros indicó un excelente acuerdo con predicciones del efecto de un ?linker? flexible. El largo y composición del ?linker? se encuentra conservado en cepas de E1A dentro del rango óptimo para potenciar la unión, sugiriendo una conservación evolutiva de este parámetro para permitir un efectivo desplazamiento de E2F.