Proteína supresora de tumores retinoblastoma: expresión, purificación y estudios preliminares por RMN

ALVARADO EM; GUILLAUMET G; ARAN M; CHEMES, L.B.; DE PRAT-GAY, G.; CICERO, D

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

La proteína supresora de tumores Retinoblastoma (Rb) juega un rol central en el control del ciclo celular, el desarrollo, la diferenciación y la estructura de la cromatina1. Rb es funcionalmente inactivada en una gran variedad de tumores y es el blanco de numerosos virus oncogénicos. Se han reportado cerca de 100 proteínas blanco que se asocian con Rb y que son ejes principales en una gran red de interacciones proteína-proteína2. A pesar de la relevancia funcional de algunas de estas interacciones, la falta de información biofísica y bioquímica ha impedido una adecuada comprensión de las bases moleculares de la interacción con proteínas virales y de la modulación de la maquinaria de la célula huésped en la regulación del ciclo celular. La expresión y purificación de Rb recombinante ha demostrado ser una tarea difícil y hasta el momento no existen estudios estructurales de la forma completa. Con el objetivo de estudiar la estructura en solución y la interacción de Rb con blancos virales y celulares, se abordó la estrategia de analizar múltiples dominios por Resonancia Magnética Nuclear (RMN). Se seleccionó el dominio RbAB, que contiene el principal sitio de interacción con la oncoproteína E72 del virus del papiloma humano (HPV), y sus variantes RbA y RbABLD (sin una región conectora entre los subdominios A y B). En este trabajo presentamos la optimización de las condiciones de expresión de RbAB y sus variantes en medio mínimo M9 y los resultados preliminares de RMN.