GENOTIPIFICACIÓN DE LA INVERSION DEL INTRON 22 DEL GEN DEL FVIII DE COAGULACIÓN MEDIANTE PCR DE LARGA DISTANCIA.

DE BRASI C, ROSSETTI L, LARRIPA I.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; XLVI Congreso de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2001

SAIC

La hemofilia A (HA) es una enfermedad hemorrágica, hereditaria, ligada al sexo caracterizada por déficit en el FVIII de coagulación. El 40-45 % de las HA severas sin caudadas por la inversión del intrón. 22 (Inv22). A pesar del reporte de un método basado en PCR de larga distancia (LD PCR) de un dolo tubo (Liu et al, 1998, Blood 92: 1458-9) para detectar la Inv22 en lugar del lento y laborioso Southern blot; dificultades de tipo práctico asociadas a la resolución de amplímeros de parecida longitud e intensidad desbalanceada (10, 11 y 12 Kb) impiden el reemplazo confiable de un método por otro. Este reporte describe el diseño y validación de una modificación del método de Lui et al para estudiar la Inv22, que incluye la genotipificación en tubos separados de los alelos normal (12 Kb) y mutado (11 Kb) de cada muestra. La presencia o ausencia de señal específica permite determinar los 3 posibles genotipos: Inv22 (+), (-) o (+/-). Las condiciones de reacción y termociclado fueron optimizadas. El método propuesto fue validado en un experimento a ciegas comparando los resultados de 11 muestras previamente genotipificadas por Southern blot, obteniéndose una perfecta correlación. Estos resultados indican la confiabilidad del método y nos permiten proponerlo para se incorporado a la rutina de diagnóstico molecular en HA severa.