INVESTIGADORES
DE BRASI Carlos Daniel
congresos y reuniones científicas
Título:
DETECCIÓN DE TODAS LAS MUTACIONES ACTIVANTES REPORTADAS DEL ONCOGEN NRAS HUMANO MEDIANTE LA UTILIZACIÓN DE GENERADORES DE HETERODÚPLEX (GH).
Autor/es:
BELLI C, DE BRASI C, LARRIPA I.
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Congreso; XLVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2003
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
Las mutaciones puntuales del gen NRAS que afectan los codones 12, 13 y 61 han sido reportadas en varios tumores y enfermedades hematológicas. Aunque existen numerosos métodos para el análisis de dichas mutaciones, ellos presentan desventajas asociadas a la especificidad y/o sensibilidad. El método de GH se basa en el comportamiento electroforético diferencial de heterodúplex inducidos entre la muestra incógnita y un generador sintético, el cual posee un identificador de las mutaciones a analizar. Objetivo: Diseñar un nuevo GH capaz de detectar las mutaciones del codón 61 y que funcione en una PCR multiplex, junto al previamente descrito para los codones 12 y 13 (Hum Mut. Belli et al., 2003), a fin de detectar todas las posibles mutaciones activantes del gen NRAS.
El GH-61, cuyo indicador es una inserción de 5T, discriminó las 7 mutaciones (panel de plásmidos mutantes) de la secuencia normal y fue capaz de trabajar en conjunto al GH-12-13 en una PCR multiplex. Por ende, en un solo ensayo pueden ser discriminados los 19 patrones alterados de los 2 patrones normales. El método fue probado en pacientes y en líneas celulares hematológicas (HL60, AL-HL3, Molt-4, P39, RS4-11) con mutaciones previamente caracterizadas y/o reportadas. Además, fueron utilizados controles normales (dadores normales y la línea celular K562) a fin de descartar bandas inespecíficas que pudieran simular mutaciones. La técnica resultó altamente específica, sensible, reduce tiempos y costos, debido a que sólo requiere una amplificacion por PCR y una electroforesis en gel de poliacrilamida no desnaturalizante. Este método representa una alternativa para la detección de las mutaciones puntuales del gen NRAS, facilmente aplicable tanto para análisis de series clínicas como a la rutina diagnóstica.
