Determinación de actividad lipásica en semillas de girasol

FLORENCIA SALABERRÍA; CAMILA A. PALLA; MARÍA ELENA CARRÍN

Córdoba

Congreso; V Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2014

Universidad Nacional de Córdoba - Secretaría de Ciencia y Tecnología, Ministerio de Industria, Comercio, Minería y Desarrollo Científico Tecnológico

Las lipasas son un grupo importante de biocatalizadores que actúan naturalmente en la hidrólisis de los triglicéridos liberando los ácidos grasos y el glicerol. La importancia y aplicación de las lipasas en reacciones de síntesis ha aumentado notablemente en la última década, por lo que las mismas se han convertido en un recurso muy requerido para la modificación de grasas y aceites, y para la obtención de subproductos de la industria oleoquímica. Las lipasas han sido purificadas y caracterizadas desde diversas fuentes (animal, microbiana y plantas), siendo las lipasas microbianas las más estudiadas y aplicadas en trabajos de investigación hasta el momento. Sin embargo, actualmente existe un interés creciente en las lipasas obtenidas de plantas, debido a que serían económicas, muy versátiles y estables en medios orgánicos. Teniendo presente lo anterior y basándonos en los avances ya reportados en la bibliografía científica, hemos comenzado a estudiar la obtención de actividad lipásica en semillas de girasol. El objetivo del presente trabajo es contrastar algunos resultados publicados en la literatura científica internacional con los obtenidos experimentalmente en nuestro laboratorio, siguiendo el mismo procedimiento que en dichas publicaciones. La metodología general de trabajo consistió en descascarar manualmente las semillas seleccionadas, molerlas, extraer el aceite mediante agitación en presencia de solvente a baja temperatura, filtrar y evaporar el solvente residual, y utilizar el material obtenido como extracto sólido de lipasas. Para testear la actividad enzimática, se realizaron reacciones de hidrólisis con aceite de girasol alto oleico, y reacciones de acidólisis entre dicho aceite y una mezcla de ácidos grasos saturados. Se evaluaron diferentes semillas, pretratamientos de las mismas (con y sin germinación, y lavados con acetona o hexano como solventes de extracción del aceite), medios de reacción (según indicaciones del proveedor de la lipasa comercial o de acuerdo a lo reportado en bibliografía), condiciones de reacción (temperatura, tiempo), métodos de cuantificación de la actividad lipásica (en reacciones de hidrólisis mediante titulación en continuo o a tiempo final, y en acidólisis por cromatografía GLC). En todos los casos, los resultados obtenidos se contrastaron con el blanco de reacción adecuado de forma tal de poder restar todo efecto que no provenga de la actividad lipásica sobre la reacción de interés. En general, los resultados mostraron que, salvo en tiempos de reacción muy prolongados (48h), no existen diferencias significativas entre los resultados de reacción y los blancos correspondientes. Por otro lado, se encontró que varios autores han reportado actividad enzimática sin restar el efecto del blanco adecuado de reacción, por lo cual no se podría asegurar a ciencia cierta si en dichos extractos sólidos existiría la mencionada actividad o no. Esto permite concluir que al menos varios de los resultados reportados en la bibliografía deberían ser contrastados contra el blanco adecuado antes de considerar los cambios en el medio de reacción como productos de la reacción de interés.