Evaluación de la alergenicidad de proteínas de soja recombinantes en un Modelo Murino de alergia a leche de vaca

CURCIARELLO RENATA; CANDREVA ÁNGELA; SMALDINI PAOLA; FOSSATI CARLOS; PETRUCCELLI SILVANA; DOCENA GUILLERMO.

San Miguel de Tucuman

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

Sociedad Argentina de inmunologia

La inmunoterapia alergeno específica para el tratamiento de las alergias alimentarias tiene como objetivo alterar la respuesta alérgica al alimento nocivo. Nuestro grupo ha descripto reactividad cruzada ente proteínas de Soja (S) y de leche de vaca (PLV), que permite explicar la intolerancia a productos que contienen S en alérgicos a LV. Una alternativa para evitar los efectos adversos de la inmunoterapia consiste en emplear proteínas modificadas o péptidos en lugar del alergeno El objetivo del presente trabajo es estudiar la alergenicidad cruzada de distintas proteínas y/o péptidos recombinantes de S utilizando un modelo murino de alergia a PLV. Tres proteínas recombinantes de Soja se obtuvieron en E.coli: P34, P28 y la subunidad α de β-conglicinina de donde se obtienen dos fragmentos peptídicos: α-CTD que contiene el dominio C-terminal y el péptido PA que contiene un epitope inmunorreactivo de reactividad cruzada. Se sensibilizaron ratones Balb/c por vía oral con PLV y toxina colérica (grupo “sens”) o sólo con PLV (grupo “control”), por 6 semanas y se evaluó la respuesta humoral y celular (IgE, IgG1, IgG2a, IL-5, INF-γ, histamina plasmática), prueba cutánea (PC) y signos clínicos compatibles con una respuesta de tipo Th2, luego del desafío oral con PLV y S. Los animales sensibilizados mostraron niveles de anticuerpos IgE e IgG1 específicos a PLV que reconocieron distintos componentes recombinantes de S. IgE S 0,53±0,19 vs 0,08±0,004 sens vs. control , e IgG1 (P34 0,28±0,2 vs. 0,11±0,01; P28 0,44±0,1 vs 0,15±0,01; α 0,53±0,2 vs 0,23±0,02; α-CTD 0,25±0,01 vs 0,18±0,02 y PA 0,22±0,06 vs 0,14±0,02 sens vs. control) A partir de esplenocitos estimulados con las distintas proteínas se demostró la presencia de LT específicos de PLV con capacidad de ser estimulados por las distintas proteínas de S. Se cuantificó la secreción de IL-5 (P34 12±5 vs 2±0.1 pg/ml; P28 nd vs. 4±0,1 pg/ml; α 76,3±15 vs. 26,2±10 pg/ml; α-CTD 5,5±3 vs. nd pg/ml y PA 9,65±10 vs. nd pg/ml, sens vs control. Se obtuvo PC positiva para P34, α y α-CTD y negativa con P28 y PA. En conclusión, aquellas proteínas de S que habían demostrado reactividad inmunoquímica in vitro frente a distintos anticuerpos específicos anti-PLV, y sobre las cuales se habían identificado péptidos inmunodominantes y posiciones aminoacídicas críticas para la reactividad cruzada, demostraron in vivo la alergenicidad cruzada. Además el péptido PA que contiene un epitope dominante, es capaz de activar LT y no induce la degranulación de mastocitos, por lo cual podemos concluir que este péptido contiene un epitope T y un epitope B lo cual lo convierte en un péptido candidato para una vacuna tolerizante.