Efecto de los Bisfosfonatos sobre células progenitoras de pulpa dental de rata

FERNANDEZ JM; GANGOITI MV; CORTIZO AM; MOLINUEVO MS

Congreso; 1º Congreso Argentina de Osteologia AAOMM-CAO; 2016

Los bifosfonatos (BPs) ejercen acciones moduladoras sobre la resorción y formación ósea; poseen gran afinidad por la hidroxiapatita (HAP), permaneciendo adheridos a los tejidos mineralizados. La dentina es un tejido conectivo mineralizado que posee un gran contenido de HAP. Se ha demostrado que el Alendronato (Ale) estimula la capacidad de los odontoblastos de secretar dentina in vivo, siendo depositado junto con este material de manera similar a lo que ocurriría en la HAP ósea. Sin embargo, actualmente existen pocos datos respecto a la acción directa de los BPs sobre los odontoblastos o sus precursores. El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto directo de dos BPs, Ale y Risedronato (Rise), sobre Células Progenitoras de Pulpa Dental (CPPD). Las CPPD fueron obtenidas de ratas Sprague-Dawley macho adultas, sacrificadas bajo anestesia mediante dislocación cervical para disecar los incisivos inferiores. La pulpa dental se extrajo mediante tracción mecánica con tiranervios introducido en el canal radicular y suspendida en DMEM-10% de FBS e incubado en una atmósfera humidificada de 95% de aire y 5% de CO2 a 37°C hasta obtener una monocapa celular. Se evaluó la proliferación luego de 48 hs con dosis crecientes de Ale o Rise (ensayo de cristal violeta). La diferenciación odontoblástica se evaluó incubando las células en medio osteogénico con o sin Ale (10-7 M) o Rise (10-7 M). A los 15 días se determinó la actividad de fosfatasa alcalina (FAL, degradación de p-nitrofenilfosfato (p-NPP) a pH=10,5); colágeno tipo 1 (COLt1, tinción con sirius red) y luego de 21 días el depósito de mineral (MIN, tinción con rojo de alizarina). Se ha demostrado que durante el envejecimiento los odontoblastos desarrollan sistemas lisosomales autofágicos que poseen fosfatasas ácidas, y disminuyen su capacidad secretora. Así, evaluamos la actividad de fosfatasa acida (FAC, degradación de p-NPP, pH=5) como marcador de envejecimiento luego de 14 días de cultivo en medio osteogénico. Los resultados se expresan como la media ± SEM. Las diferencias entre grupos fueron analizadas por el test de ANOVA (one-way).