PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA PROTEASA ALCALINA OBTENIDA A PARTIR DE SUBPRODUCTOS DEL SALADO Y MADURADO DE ANCHOÍTA

DANIELA LAMAS; MARÍA ISABEL YEANNES; AGUEDA MASSA

Córdoba

Congreso; VI Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2016

Argentina es el principal productor de anchoíta (Engraulis anchoita) salada-madurada y una considerable cantidad de saladeros se asientan en la ciudad de Mar del Plata. Se estima que la obtención de este producto genera alrededor de 6000 toneladas anuales de residuos (cabezas y vísceras con elevado contenido de sal), que son descartados al predio municipal de disposición final de desechos, ocasionando un impacto ambiental negativo. Frente a esta situación actual, los saladeros han mostrado un gran interés en generar alternativas tecnológicas que permitan valorizar estos residuos. El objetivo del presente trabajo fue extraer, purificar y caracterizar proteasas alcalinas presentes en estos residuos, y evaluar su potencial aplicación como aditivos para la industria detergente. El extracto crudo enzimático se obtuvo por homogenización de las cabezas en agua destilada (1:4 p/v) y posterior centrifugación (10000g, 30 min, 4ºC). La purificación se realizó utilizando acetona fría en una proporción extracto crudo: acetona 1:1,5. Se descartó la fracción de lípidos solubles en el solvente y las proteínas precipitadas fueron recuperadas en buffer Tris-HCl. La concentración de proteínas solubles en los extractos enzimáticos, se determinó por el método de Lowry. Los resultados del extracto crudo y purificado fueron 7,78±0,41 y 2,24±0,15 mg/mL, respectivamente. La actividad proteolítica se evaluó utilizando azocaseína como sustrato y los resultados obtenidos fueron 0,0301±0,0038 y ∆Abs/min/mg para el extracto crudo y 0,0861±0,0037 ∆Abs/min/mg para el extracto purificado. Los valores óptimos de pH y temperatura para la reacción enzimática resultaron 7,87 y 58,5° C, respectivamente. Los extractos proteicos mostraron gran estabilidad proteolítica en el rango de pH comprendido entre 7 y 10; y se mantuvo más del 70% de su actividad a temperaturas comprendidas entre 40 y 80°C durante 30 minutos. Después del tratamiento con acetona, la fracción de enzima se purificó 2,86 veces y se logró una recuperación del 82,21% de su actividad. Se obtuvo un aumento en el porcentaje de actividad enzimática total cuando el extracto proteico se incubó con 50 mM de sodio dodecil sulfato, y no hubo inhibición significativa después de la incubación con la misma concentración de ácido etilendiaminotetraacético. El estudio de electroforesis en gel, mostró bandas de masa molecular correspondientes a 25,0 kDa. Los datos obtenidos de actividad y estabilidad de los extractos enzimáticos analizados a valores de pH alcalinos y en presencia de surfactantes junto con la caracterización por electroforesis, indicarían la presencia de enzimas tipo tripsina. Estos resultados sugieren que la extracción de proteasas alcalinas a partir de los subproductos de la industria del salado y madurado de Engraulis anchoíta, podría considerarse una alternativa válida, ecológica y rentable para valorización los subproductos pesqueros.