El bloqueo de la degradación autofagosomal promueve la liberación de mediadores que incrementan la resistencia a Vemurafenib

FALCON C; DELGADO MONS J; PEREZ C; ALVAREZ SE

Buenos Aires

Workshop; I Workshop del Grupo Argentino de Vesículas Extracelulares; 2023

Vemurafenib (Vem) se utiliza en el tratamiento de melanomas que tienen la mutación BRAFV600E, pero se induce rápidamente resistencia a este fármaco. La autofagia ha sido implicada en la resistencia a Vem.Objetivo: estudiar la influencia de la inhibición de la degradación autofagosómica sobre la resistencia a Vem en células de melanoma humano.Resultados: Las células Lu1205 cultivadas en hipoxia (Hx) tienen mayor resistencia a Vem que en normoxia (Nx). Mostramos mediante transferencia Western que Hx produce acumulación de LC3 y p62, lo que indica una disminución del flujo autofágico. Aunque la inhibición de la autofagia con NH4Cl o cloroquina (Cq) en Nx y Hx aumentó la sensibilidad a Vem (viabilidad y apoptosis de MTT), solo los medios condicionados (CM) de cultivos en Hx transfirieron la resistencia de Vem a células sensibles y esta capacidad no fue modificada significativamente por la autofagia. inhibidores. Sorprendentemente, CM de Lu1205 cultivado en Nx con NH4Cl o Cq aumentó la resistencia a Vem de células sensibles, de manera similar a CM-Hx. Además, desarrollamos una nueva línea celular derivada de células Lu1205 que expresan la proteína M2 de la cepa A/PR8 del virus de la influenza, que inhibe la fusión autofagosoma-lisosoma. Estas células (Lu1205-M2iv) mostraron una mayor resistencia a Vem tanto en Nx como en Hx y una mayor capacidad migratoria con respecto a la línea parental. Además, la CM obtenida de células Lu1205-M2iv mejoró la quimioatracción de las células THP-1 diferenciadas con PMA y transfirió la resistencia a las células sensibles. Finalmente, las células Lu1205 con resistencia adquirida a Vem (Lu1205R) mostraron un flujo autofágico fuertemente disminuido y una mayor expresión del ARNm de RAB27a y RAB27b involucrados en las vías excretoras. Estas células disminuyeron sutilmente su viabilidad cuando se cultivaron con Vem en presencia de inhibidores de la autofagia y mostraron una mayor capacidad para inducir resistencia a Vem en células sensibles.Conclusión: La terapia con inhibidores de la degradación autofagosómica en células de melanoma aumenta la sensibilidad inicial a Vem pero podría promover la resistencia general del tumor al tratamiento.