ESTUDIO DE LA METACASPASA TCMCA3 DE TRYPANOSOMA CRUZI

PEREZ, BRIAN; BOUVIER, LEÓN ALBERTO; NIEMIROWICZ, GABRIELA TERESA; SALAS SURDUY, EMIR; CAZZULO, JUAN JOSÉ; ALVAREZ, VANINA EDER

Buenos Aires

Encuentro; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozología; 2015

Sociedad Argentina de Protozología

Las metacaspasas son cisteín proteasas homólogas estructurales de las caspasas, sin embargo difieren radicalmente en la especificidad de sustratos al clivar proteínas luego de residuos de arginina y lisina, en lugar de ácido aspártico. Esta familia de enzimas se encuentra exclusivamente presente en protozoarios, plantas y hongos, donde se han hallado involucradas en muerte celular programada, progresión del ciclo celular y remoción de agregados proteicos. Debido a que no se conocen sus sustratos, los mecanismos moleculares mediantes los cuales participan en dichos procesos aún no han sido dilucidados. En Trypanosoma cruzi existen dos variantes, la TcMCA3 y la TcMCA5. En particular existen evidencias que TcMCA3 estaría involucrada en el arresto del ciclo celular, protección de muerte celular y diferenciación. Adicionalmente resultados preliminares del laboratorio sugieren que podría participar en procesos de invasión celular y establecimiento de la infección. En experimentos de nuestro laboratorio se determinó que la expresión en Escherichia coli conduce a la agregación de TcMCA3 en cuerpos de inclusión. Con el fin de obtener la proteasa soluble y activa empleamos dos abordajes. Por un lado realizamos la puesta a punto de un protocolo de purificación, solubilización y replegamiento de TcMCA3 a partir de cuerpos de inclusión. Alternativamente utilizamos el sistema de expresión de baculovirus en células de insecto, en las cuales pudimos expresar TcMCA3-GST de forma soluble. Por lo tanto en este trabajo generamos un método para obtener TcMCA3 activa y con elevada pureza. Actualmente se está llevando a cabo la caracterización bioquímica de la metacaspasa obtenida a partir de cada abordaje de forma comparativa. A su vez estamos continuando con el estudio de patrones de expresión a lo largo del ciclo de vida en parásitos en cultivo y células infectadas con el fin de establecer el potencial rol de TcMCA3 durante el proceso de invasión e infección.