CMC-940-19 Modelo murino de colonización/infección de C. coli.

RUIZ, JULIA; FRIZZO, LAUREANO; ZAYAS, MARCELO; ORTEGA, HUGO

2019-11-11/2019-12-19

Metabolismo murino y microbiología

Sanidad animal-Enfer. infec. bacterianas

Se utilizaron ratones de la cepa Balb/c, hembras, de 6 semanas de edad. Los animales se dispusieron en 2 grupos de 15 individuos cada uno. Se realizó un pretratamiento con antibióticos en agua de bebida durante 5 días: enrofloxacina (25 mg/kg/día), florfenicol (25 mg/kg/día), trimetroprim sulfa (50 mg/kg/día) y oxitetraciclina (15 mg/kg/día). La administración de C. coli se realizó dos días después de retirados los antibióticos. Un grupo fue administrado con la cepa de C. coli que logró el 100% de colonización en la prueba piloto y otro grupo se utilizó como control. Los ratones fueron alimentados con agua y alimento suministrado ad libitum a lo largo del experimento estimado de 4 semanas. Se mantuvieron condiciones estándares de alojamiento: 22?24 °C, 55 ± 15% de humedad, 12 h luz/12 ciclo de oscuridad. El ensayo de colonización se realizó durante 28 d. A intervalos semanales (día 0, 7, 14, 21 y 28), se hizo un análisis microbiológico de la materia fecal mediante recuento en placa, se evaluaron los signos clínicos y se sacrificaron tres ratones de cada grupo para la extracción y análisis de órganos intestinales, bazo, hígado y sangre.NecropsiasSemanalmente se realizó la necropsia programada de tres animales de cada grupo experimental. Los animales fueron desangrados mediante inyección intracardiaca y la necropsia fue realizada en base a las técnicas convencionales. Tratamiento de muestras biológicasSe recogieron los siguientes órganos: hígado, bazo, intestino delgado (yeyuno e íleon) e intestino grueso (ciego) en esta secuencia utilizando instrumental estéril en cada tejido para minimizar la posibilidad de contaminación bacteriana entre muestras. El peso del bazo fue determinado junto con el peso vivo mediante el cálculo del índice de peso esplénico (IPE) de la siguiente manera:IPE =Peso del bazo (g)Peso vivo (kg)El hígado, el bazo, íleon y ciego obtenidos en condiciones asépticas fueron homogeneizados con un stomacher en solución fisiológica. Para medir la translocación al medio interno en bazo e hígado, y la cuantificación en las porciones intestinales, los homogeneizados se sembraron en los siguientes medios: MRSvan, (lactobacilos), MRS (población láctica), VRBL (coliformes), mCCDA (C. coli). Las placas de Petri se incubaron a la temperatura, tiempo y atmósfera correspondiente y posteriormente se contaron las colonias características.Las porciones de yeyuno se procesaron con un kit específico para extraer el ADN bacteriano presente. Luego se hará un análisis de secuenciación masiva del contenido intestinal de cada muestra. Este estudio se realizará en las instalaciones del Servicio Central de Apoyo a la Investigación (SCAI) de la Universidad de Córdoba, España. Las muestras de sangre también fueron tomadas semanalmente inmediatamente después del sacrificio del animal.