Simulación de la absorción intestinal de péptidos antioxidantes

ORSINI C,, AÑÓN MC Y TIRONI VA

Córdoba

Congreso; IV Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2012

En los últimos años muchos cereales y pseudocereales han sido objeto de investigación dadas sus benéficas propiedades y a su posible incorporación en alimentos de consumo diario. En trabajos previos se ha demostrado una prometedora actividad antioxidante de ciertas proteínas y/o péptidos de amaranto. Es por ello que el objetivo del presente trabajo fue determinar dicha actividad sobre distintas fracciones peptídicas de Amaranthus mantegazzianus generadas mediante una digestión gastrointestinal simulada, y evaluar si las mismas podrían ser absorbidas a través de la mucosa intestinal para poder ingresar al organismo y ejercer su acción. Se prepararon un aislado proteico de amaranto (Ais) y un hidrolizado extensivo con alcalasa (Halc), los que fueron sometidos a una  digestión gastrointestinal in vitro,  exponiéndose primero a la acción de la pepsina (Pe) (pH 2, Pe/prot: 1/10, 60 min, 37ºC, agitación) simulando la digestión estomacal, y luego a la acción de la pancreatina (Pa) (pH 6, Pa/prot: 1/10, 60 min, 37ºC, agitación) simulando la digestión intestinal, obteniéndose las muestras AisDIG y HalcDIG. Se prepararon las fracciones solubles de ambos digeridos en buffer fosfato 35mM pH 7,8 y se analizaron y separaron mediante FPLC, a través de una columna preparativa de exclusión molecular Superdex 30 con un rango de separación menor a 10 kDa. De cada muestra se colectaron 62 fracciones, sobre las cuales se evaluó la actividad antioxidante a través de dos métodos: ORAC, en el cual se generaron radicales peroxilo a partir de AAPH, y HORAC, en el cual se generaron radicales hidroxilo a través de la reacción de Fenton, utilizando peróxido de hidrógeno y una sal de cobalto. A través de ambas metodologías se encontraron fracciones con significativa actividad, algunas de las cuales se sometieron a la simulación de la absorción gastrointestinal. Para ello, se sembraron células Caco2-Tc7 sobre insertos de policarbonato (0.4μm, 12mm de diámetro) que se colocaron en fosas de placas de cultivo generando una cámara apical y una basolateral. Luego de 18 días de incubación se formó una monocapa de resistencia transepiltelial constante y se sembraron las muestras en la cámara apical, incubándolas durante dos horas a 37 ºC con un 5% de CO2. Se analizaron por RP-HPLC las fracciones iniciales y las de las cámaras apical y basolateral luego de la incubación. Se observó que ciertos péptidos serían capaces de atravesar la monocapa, lo cual sería muy prometedor si pudieran mantener su actividad luego de ser absorbidos. Estos resultados reafirman que las proteínas de amaranto son una fuente interesante de péptidos activos que se podrían generar en el organismo por efecto de la digestión gastrointestinal, y constituyen una primera aproximación en la evaluación de la potencial absorción de dichos péptidos.