Pared celular y ¦Â glucanos adsorbentes de micotoxinas extra¨ªdos de levaduras con propiedades probi¨®ticas.

PEREYRA CM; KELLER KM; AMINAHUEL C; ROSA CA; ROSA CAR; DALCERO AM; CAVAGLIERI LR

R¨ªo Cuarto

Congreso; VII Congreso Latinoamericano de Micotoxicolog¨ªa; 2013

Universidad Nacional de R¨ªo Cuarto

Las levaduras, principalmente Saccharomyces cerevisiae son actualmente los microorganismos m¨¢s utilizados para contrarrestar el problema ocasionado por las micotoxinas en alimentos para animales de producci¨®n. Si bien, se ha demostrado la capacidad de adsorci¨®n entre la pared de levaduras y varias micotoxinas, la informaci¨®n del mecanismo de micotoxinas vinculante a la pared celular es escasa. Sin embargo, existe una correlaci¨®n entre la cantidad de ¦Â-glucanos en la pared y la eficacia de adsorci¨®n de algunas micotoxinas. El objetivo de este estudio fue extraer la pared celular y la fracci¨®n de ¦Â-glucanos de cepas probi¨®ticas de S. cerevisiae y evaluar la adsorci¨®n de aflatoxina B1 (AFB1) y zearalenona (ZEA). Las cepas estudiadas (RC009, RC016, RC012, RC008) fueron inoculadas en medio l¨ªquido e incubadas a 28¡ãC a 200 rpm por 48 h. Los tubos fueron centrifugados, el sobrenadante descartado y el pellet fue lavado con soluci¨®n buffer. Para la extracci¨®n de la pared se trabajo a 4¡ãC adicionando nuevamente al pellet la soluci¨®n buffer y perlas de vidrio en agitaci¨®n. Para la extracci¨®n de la fracci¨®n de ¦Â-glucanos insolubles en ¨¢lcali, se parti¨® de 1 g de pared agregando KOH 1M incubando en agitaci¨®n durante 20 h a 4¡ãC. Las fracciones de pared (1 mg) y ¦Â-glucanos (1 mg) de cada cepa fueron evaluadas para determinar la adsorci¨®n y desorci¨®n de AFB1 (1000 ppb) y ZEA (1000 ppb) a pH 3 y pH 6. Los ensayos fueron realizados por duplicado y se hicieron controles positivos de cada toxina y controles negativos de cada pared y ¦Â-glucanos. La detecci¨®n y cuantificaci¨®n de AFB1 y ZEA se realiz¨® por cromatograf¨ªa l¨ªquida de alta precisi¨®n (HPLC). Las paredes de las cuatro cepas adsorbieron AFB1 en concentraciones que variaron entre 34,7 a 74,4 ppb y entre 63 a 91,5 ppb a pH 3 y pH 6, respectivamente. Los ¦Â-glucanos no fueron capaces de adsorber la toxina a pH 3 mientras que a pH 6 adsorbieron entre 67,7 a 108,6 ppb. La desorci¨®n de AFB1 fue variable. En relaci¨®n a la adsorci¨®n de ZEA, las paredes fueron capaces de adsorber concentraciones entre 361 a 651 ppb a pH 3, mientras que a pH 6 la adsorci¨®n fue de 226 a 256 ppb. La adsorci¨®n de ZEA por parte de los ¦Â-glucanos fue mayor en todos los casos con porcentajes de adsorci¨®n de 73,8% a 91,8%, comparados con sus respectivas paredes a pH 3, a excepci¨®n de los ¦Â-glucanos extra¨ªdos de la cepa RC012 (340 ppb). En relaci¨®n a los ensayos realizados a pH 6 la adsorci¨®n fue menor comparado con sus respectivas paredes, los valores de adsorci¨®n variaron entre 145 a 298 ppb. En ninguno de los ensayos realizados con las paredes y los ¦Â-glucanos para ZEA a pH 3 existi¨® desorci¨®n, mientras que a pH 6 la desorci¨®n fue de 45,5 a 67,9% para las paredes y de 40 a 81,2% para la fracci¨®n de los ¦Â-glucanos. Tanto las paredes como la fracci¨®n de los ¦Â-glucanos fueron capaces de adsorber cantidades importantes de ZEA, demostrando que la adsorci¨®n es dependiente de la cepa de S. cerevisiae de donde fueron extra¨ªdos y del pH estudiado.