La regulación cruzada entre los mecanismos de chequeo y los de reparacion del ADN después de irradiación UV

SPERONI, J ; SORIA, G ; BELLUSCIO, L ; GOTTIFREDI, V

Mar del Plata, Argentina

Conferencia; REUNION ANUAL SAIC-SAFIS 2008; 2008

SAIC

la regulación cruzada entre los mecanismos de chequeo y los de reparación del ADN después de IRRADIACION UV. J. Speroni, G. Soria, L. Belluscio y V. Gottifredi Laboratorio de Ciclo Celular y Estabilidad Genomica. Fundacion Instituto Leloir. CONICEt, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina Los mecanismos de chequeo son redes de transducción de señales que se activan en respuesta a rupturas de ADN a doble cadena y acumulación de ADN simple cadena. La irradiación UV genera aductos entre bases adyacentes lo que promueve la acumulación de ADN simple cadena y activando la vía de chequeo que involucra a las quinasas ATR y CHK1. Esto genera un escenario adecuado para la actividad de la Reparación por Escisión de Nucleótidos (NER) y la Síntesis por Translesión (TLS). Este último mecanismo no representa un proceso de reparación per se sino que evita el bloqueo de la replicación en la lesion, promoviendo la sobrevida celular.. El objetivo de este trabajo es evaluar si el correcto funcionamiento de los mecanismos de chequeo es necesaria para una eficiente activacion de NER y TLS después de irradiación UV. Para esto se utilizó como estrategia experimental la modulación negativa transitoria de diversas proteínas de chequeo (ATR, RPA, Rad17, CHK1, Claspin) mediante siRNAs y expresión de mutantes enzimaticamente inactivos. Para evaluar el  efecto de la inhibición de los mecanismos chequeo sobre NER se examinó el reclutamiento de factores específicos involucrados en dichos mecanismos de reparación a las zonas de ADN lesionado. Con respecto a la activación de TLS se monitorio los niveles de ubiquitinación de PCNA, modificación post-traduccional relevante para TLS y el reclutamiento de la polimerasa de TLS, Pol h, a sitios de daño. En conjunto, nuestros datos sugieren que el correcto funcionamiento de los mecanismos de chequeo sería necesario para la eficiente activación de TLS, mientras que no estaría involucrado en la remoción de lesiones por NER.