Nueva generación de ensayos cuantitativos para la certificación de alimentos libres de gluten

DOÑA VV; URRUTIA M; BAYARDO M; GOLDBAUM F; CHIRDO, FG

Buenos Aires

Simposio; 1er Simposio Latinoamericano de Enfermedad Celíaca; 2007

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:EN-GB;} p.MsoBodyText2, li.MsoBodyText2, div.MsoBodyText2 {margin-top:0cm; margin-right:0cm; margin-bottom:6.0pt; margin-left:0cm; line-height:200%; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:EN-GB;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> La dieta libre de gluten es el único tratamiento efectivo que permite la recuperación de la mucosa intestinal. El cumplimiento de la dieta requiere el empleo de productos certificados, normalmente empleando métodos de ELISA. Para esto, se debe realizar una extracción etanólica de prolaminas del producto. Dado que ésta es incompleta, se ha propuesto el empleo de agentes desnaturalizantes como 2-Mercaptoetanol (2-ME) y cloruro de guanidinio (GuHCl) para aumentar su eficiencia. En trabajos previos mostramos que estos agentes interfieren cuando se emplean anticuerpos convencionales. Dado que los camélidos (Llama) producen un tipo particular de anticuerpos, en los que el sitio de unión a antígeno está formado por una sola cadena (VHH) y es de elevada estabilidad fisicoquímica, decidimos estudiar su empleo en ensayos de cuantificación. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un método inmunoquímico de detección de gliadinas basado en fragmentos de anticuerpos recombinantes de Llama. A partir de Llamas, inmunizadas con gliadinas, se obtuvo una biblioteca de expresión en fagos de fragmentos VHH. Se obtuvieron seis clones específicos, cuatro tuvieron la misma secuencia, uno difirió en un residuo y el clon 26, el más estable, presentó 10 residuos diferentes. Dicho clon es estable aún en presencia de etanol 15%, 0,5% 2-ME, 0,5M GuHCl y permitió desarrollar un ensayo cuantitativo con un nivel de detección de 2,5 ng de gliadinas/ml. En conclusión, se desarrolló un ensayo cuantitativo empleando fragmentos VHH recombinantes que permite la detección específica de gliadinas con alto nivel de detección, apto para el uso en la certificación de alimentos libres de gluten.