INVESTIGADORES
CHIRDO Fernando Gabriel
congresos y reuniones científicas
Título:
Producción de transglutaminasa 2 (TG2) humana recombinante para el mapeo de la reactividad de los anticuerpos de sangre periférica de pacientes celíacos
Autor/es:
BAYARDO M; PUNZI F; ALLEGRETTI Y; CHIRDO FG
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Simposio; 1er Simposio Latinoamericano de Enfermedad Celíaca; 2007
Resumen:
Transglutaminasa 2 es una enzima que por su actividad de deamidación selectiva de glutaminas, genera peptidos de gliadinas de mayor afinidad por los alelos de susceptibilidad (HLA-DQ2/DQ8) siendo relevante en la patogenia de la enfermedad celíaca. Por otro lado, TG2 fue inicialmente reconocida como el autoantígeno principal detectado en el estudio de anticuerpos antiendomisio. Los protocolos de diagnóstico incluyen la evaluación serológica de anticuerpos anti-TG2 en sangre periférica, resultando crítica la eficiencia analítica del ensayo. Existen varios métodos comerciales que emplean TG2 recombinante, pero no se han identificado los epitopes inmunodominantes. El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar TG2 humana completa y algunos fragmentos para la caracterización de la reactividad de los anticuerpos séricos de pacientes celíacos. Se obtuvo cDNA a partir de RNAm total de la línea epitelial humana, Caco-2. Para el clonado se emplearon primers diseñados sobre la secuencia Genbank M55153. El clon del gen completo de TG2 obtenido presentó una secuencia de 2064 bases de longitud, que fue publicada (Genbank AY675221). Además, se amplificaron y expresaron diferentes regiones del gen de TG2: Extremo N al core (60kDa), Core completo (40kDa). En immunoblotting los productos de expresión fueron detectados por un panel de anticuerpos monoclonales anti-TG2 producido en nuestro laboratorio cuyos epitopes reconocidos fueron mapeados a nivel molecular. En conclusión, se clonó el gen de TG2 humana completo y fragmentos de interés para el mapeo de la reactividad de anticuerpos séricos de pacientes celíacos e identificación de epitopes inmunodominantes, estudios que permitirán la posterior optimización de ensayos serológicos empleando proteínas recombinantes.
