IBYME   02675
INSTITUTO DE BIOLOGIA Y MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de dos mutantes en F424 del receptor H1 a histamina. Estudio de la interferencia en la señalización de otro receptor que transluce su señal a través de la misma vía
Autor/es:
ZAPPIA C; GRANJA GALEANO G; . COPSEL SABRINA, FERNANDEZ NATALIA, SHAYO CARINA C, DAVIO CARLOS A.; FABIAN L; TUBIO MR; SHAYO C; DAVIO C; MONCZOR F
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLII Reunión de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2010
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
El receptor H1 a histamina (rH1) es un receptor
acoplado a proteína G (GPCR) y señaliza a través de la proteína Gq. Hemos descripto
que el rH1 puede adquirir una conformación inactiva que secuestra proteína G e
interfiere en la señalización de otrosGPCRs
que transducen a través de la misma vía. Otros autores observaron que mutantes
en la fenilalanina 303 del dominio TM6 del receptor á1b adrenérgico
coinmunoprecipitan con la proteína G en forma inactiva. Mediante estudios de
alineación determinamos que la F303
esta conservada en la mayoría de los GPCRs, siendo la F424 el homólogo para el rH1. El
objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto de mutar este residuo sobre
la funcionalidad del rH1. Estimamos las interacciones que presenta F424 a
través del modelado por homología con la estructura del receptor b2 adrenérgico,
utilizando el servicio SwissModel y posterior minimización con el programa
NAMD. Dado que el anillo aromático de la
F424 posee interacciones C-C con I420, T428, N460, N464, L69,
S114, e I115, evaluamos el efecto de eliminarlo o reemplazarlo por un residuo
hidrofílico al mutar F por A y por S. En el primer caso se pierden dichas
interacciones y en el segundo, además se gana un enlace puente de hidrógeno con
el carbonilo de M421. En base a esto, realizamos dichas mutaciones en el rH1 y
evaluamos en células HEK293T transfectadas la capacidad de las mutantes de interferir
en la señalización de otro GPCR que utiliza la misma vía de transducción. Al
evaluar la acumulación de Ca2+ intracelular en respuesta a distintas
concentraciones de ATP, observamos que la presencia de las mutantes F424A y
F424S y no del rH1 salvaje, reducen en un 30% y en un 50% respectivamente la
respuesta del rATP sin modificar su CE50 (pCE50=5,8±0,1). Estos resultados sugieren
que las mutaciones realizadas sobre el rH1 podrían inducir espontáneamente una
conformación del receptor capaz de secuestrar Gq e interferir en la respuesta
de otros GPCRs que señalicen por la misma vía