Angiotensin (1-7) Induces Mas Receptor Internalization

GIRONACCI MM; CORRADI G. R; ADAMO H.P

Mar del Plata

Congreso; Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas; 2010

La unión del agonista al receptor acoplado a proteína G (RAPG) no sólo provoca su activación sino que también desencadena eventos celulares que conducen a una rápida atenuación de la respuesta, llamado desensibilización, con la consecuente endocitosis del receptor (R). Una vez internalizado, el R puede ser reciclado a la membrana plasmática, permanecer internalizado o ser direccionado a los lisosomas para su degradación. El RAPG Mas media importantes respuestas cardiovasculares. La estimulación continua con Ang-(1-7), el ligando del R Mas, produce una disminución en la respuesta. Nuestra hipótesis es que el receptor Mas se desensibiliza e internaliza frente a la estimulación por su ligando Ang-(1-7). Para comprobarlo, células HEK293T fueron transfectadas con el plásmido que contiene la construcción que codifica para la quimera R Mas fusionado a la proteína fluorescente YFP a través de su extremo C-terminal, y se evaluó la internalización y tráfico del R por colocalización con diferentes efectores que participan en la endocitosis y tráfico de R. La microscopía confocal demostró que las células expresaron la quimera Mas-YFP en la membrana plasmática. Se evaluó la funcionalidad del R Mas-YFP través de a) ensayos de unión ligando-R, donde se observó que tanto la Ang-(1-7) como el antagonista del R desplazaron la unión de 125I-Ang-(1-7) a las células (IC50: 8.6+5.0 x10-8 M y 8.3+2.8.10-9 M), y b) de la liberación de 3H-ácido araquidónico (3H-AA), la cual aumentó en presencia de Ang-(1-7) 100 nM (208+15% respecto del control, P<0.05). Para investigar la internalización del R Mas-YFP, se evaluó la endocitosis de 125I-Ang-(1-7) unida al R, la cual fue de 23+5 % a los 10 min. El R Mas-YFP colocalizó con: AP-2, un componente esencial de la endocitosis por cubiertas de clatrina; antígeno de endosomas temprano y Rab 5, marcadores de endosomas temprano; y Rab 11, marcador de vesículas de reciclado lento a membrana plasmática. Por el contrario, no colocalizó con Rab4, marcador de vesículas de reciclado rápido a membrana plasmática. Nuestros resultados demuestran que el R Mas-YFP es endocitado por cubiertas de clatrina, de allí es dirigido a los endosomas temprano y luego reciclado a la membrana plasmática.Este mecanismo explicaría la desensibilización de la respuesta que se produce frente a la estimulación persistente o con altas concentraciones de Ang-(1-7).