ANÁLISIS POR MICROSCOPÍA ÓPTICA Y ELECTRÓNICA DE BARRIDO DE LA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA DE DOS CEPAS DE BACILLUS CON POTENCIAL COMO BIOCONTROLADORES

TORRES M.J.; PEREZ BRANDAN, C.; AUDISIO, M. CARINA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGIA, II CONGRESO DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y AMBIENTAL; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

El objetivo de este trabajo fue utilizar técnicas de microscopía para evaluar cambios estructurales en mohos fitopatógenos por la acción de Bacillus subtilis subsp. subtilis PGPMori7 y Bacillus amyloliquefaciens PGPBacCA1. Los mohos evaluados en este estudio fueron: Macrophomina phaseolina Tassi (Goid) (Mp) y Fusarium solani (Fs), ambos aislados de raíces de poroto. Para la evaluación de la actividad antifúngica de los Bacillus se usó la técnica de cultivo dual y las muestras para observación en el microscopio óptico (MO) y el microscopio electrónico de barrido (MEB) fueron extraídas de: 1) intersección entre crecimiento fúngico y zona de inhibición producida por PGPMori7 y PGPBacCA1 y 2) placas de cultivo fúngico sin tratamiento (control). Para la observación en MO, las muestras se tiñeron con azul de algodón y para el MEB, las muestras se fijaron en glutaraldehído 2,5% bufferado, con posterior deshidratación, secado y metalizado. Al analizar el cultivo de Mp control, tanto con el MO como con el MEB, se observó ramificación de hifas, generalmente en ángulo recto originadas a partir de hifas principales fuertemente pigmentadas, y ramificaciones en ángulo agudo, características de este moho. Cuando se trató este fitopatógeno con células de PGPMori7 y PGPBacCA1, con el MO se pudo constatar el mayor enrollamiento de hifas y la formación de estructuras globosas. En presencia de PGPBacCA1 se detectó además el acortamiento de segmentos entre hifas y la formación prematura de esclerocios. Mientras que con el MEB se observó, en Mp tratado con PGPBacCA1, esclerocios no formados de mayor tamaño que el control, que no presentaron zonas definidas de tejidos en su interior y externamente tuvieron un arreglo hifal suelto. Cuando se evaluó el efecto de PGPMori7, se observó mayor densidad de esclerocios que el control pero de igual tamaño. El control de Fs, al MO, mostró hifas hialinas, alargadas y septadas, con poca presencia de clamidosporas, globosas, intercaladas y terminales, distribuidas en el micelio. Se identificaron abundantes microconidios y escasos macroconidios. En presencia de ambas cepas de Bacillus se observaron, tanto con el MO como MEB, una abundante producción de clamidosporas. Por análisis con el MEB, se determinó además que Fs tratado con PGPMori7 presentó una abundante y extensa formación de clamidosporas en la zona de inhibición bacteria-moho. Se pudo constatar la presencia de microconidios desprendiéndose de las fiálides. Mientras que cuando se trató a Fs con PGPBacCA1, se observó abundante producción de clamidosporas en cadenas alrededor y hacia la zona de inhibición bacteria-moho, con un aspecto deprimido de las estructuras de las clamidosporas. Para esta cepa, no se observó presencia de micro y macroconidios. La utilización de MEB potenció el estudio de la actividad antifúngica ya que reveló cambios morfológicos claves en mohos fitopatógenos por presencia de estas potenciales bacterias biocontroladoras.