Complejos estables en la bomba de calcio de membrana plasmática

IRENE MANGIALAVORI, MARIELA FERREIRA-GOMES Y JUAN PABLO ROSSI

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica. Buenos Aires (5-7 de diciembre).; 2011

SAB

Complejos estables en la bomba de calcio de membrana plasmática RESERVADO SAB Irene Mangialavori, Mariela Ferreira-Gomes y Juan Pablo Rossi IQUIFIB-Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA. Junín 956, 1113, Buenos Aires, Argentina. e-mail: irenem@qb.ffyb.uba.ar La bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA) transporta calcio contra el gradiente electroquímico desde el citoplasma hacia el exterior celular. Su ciclo de reacción es descripto con el modelo E1-E2 e involucra intermediarios fosforilados (EP) a partir de ATP.  Nuestro objetivo es estudiar los intermediarios fosforilados a través de la utilización de inhibidores utilizados en PMCA y otras bombas, que detienen a la enzima en una conformación determinada1. Nuestros resultados muestran que: (1) El Al3+ inhibe la actividad Ca2+-ATPasa y causa un aumento del 96 ± 9% en el nivel de intermediario fosforilado; (2) El AlF4-; el VO43- y el MgF42- inhiben la actividad Ca2+-ATPasa y disminuyen el nivel de intermediario fosforilado; (3) La incorporación específica de [125I]TID-PC/16, una fosfatidilcolina fotoactivable que permite estudiar las interfase lípido-proteína2,3, fue similar en -ausencia de Ca2+- (E2) y en los intermediarios análogos a E2P estudiados. Estos resultados indican que: (a) la pérdida de actividad Ca2+-ATPasa en presencia de Al3+ se debe a que este catión bloquea la desfosforilación de la enzima produciendo una acumulación del intermediario fosforilado (E1P). (b) la pérdida de la actividad por acción de AlF4-; VO43- o MgF42- se debería a que éstos impiden la fosforilación de la PMCA generando una conformación análoga a E2P. (c) la superficie accesible a los lípidos es similar en E2 y en los análogos de E2P estudiados, lo que sugiere que no existen grandes cambios estructurales en el dominio transmembrana de ambos intermediarios. 1. Murphy A.J and  Coll R.J (1993). J. Biol. Chem. 268;31,  23307-10. 2. Mangialavori  I, Villamil-Giraldo A.M, Cristina Marino Buslje, Ferreira-Gomes M, Caride A. and Rossi J.P (2009) J. Biol. Chem. 284;84823-28 3. Mangialavori I, Ferreira-Gomes M, Pignataro M.F, Strehler E.E and Rossi J.P (2010) J. Biol. Chem. 285;1 123–30 Con subsidios de ANPCYT, CONICET y UBACYT