La retracción reversible de procesos en oligodendrocitos inducida por estres oxidativo no-letal está mediada por la fosforilación de CRMP-2 en un sitioomotes the reversible retraction of oligodendrocyte processes in response to non-lethal oxidative stress

FERNANDEZ-GAMBA A.; LEAL M.C; DITULLIO M; ROHER A.E; MORELLI, L; CASTAÑO, E.M.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la SAIC; 2011

Los oligodendrocitos (OLG) forman la vaina de mielina en axones, procesoesencial para la integridad neuronal. El estrés oxidativo agudo podría causaruna mielinización inadecuada y por ende, a una disfunción neuronal. Objetivos1) Caracterizar el efecto de la acumulación de especies reactivas de oxígeno(ROS) sobre la extensión de procesos de OLG primarios y de la línea OLN-93.2) Analizar el proteoma de OLG en condiciones de estrés oxidativo agudo.Metodología Exposición a ácido 3-nitropropiónico (3-NP), detección de ROSpor diacetato de 2’7’diclorofluoresceína, viabilidad celular, microscopía confocaly análisis de imágenes. Proteómica por 2D-DIGE, digestión tríptica yespectrometría de masa. Caracterización de fosforilación por Western blot.Inhibición farmacológica de kinasas. Transfección de OLN-93 con mutantes deCRMP2. Resultados El tratamiento con 3NP (1 mM/1h) 1) no afectó laviabilidad de OLG, indujo peroxinitritos, disminuyó el diámetro de OLG y lalongitud de procesos de OLN-93 en forma reversible. Este efecto fue prevenidopor un análogo hidrosoluble de vitamina E y por N-acetil-cisteína. 2) El análisisproteómico mostró aumento de CRMP2 (1.76 veces) y disminución de proteínaribosomal SA (-2.0 veces) en OLG tratados con 3-NP respecto al control. 3) Laforma fosforilada de CRMP2 en T555 aumentó 40% con 3-NP (p<0.05) y fueprevenido por Y27632, un inhibidor de Rho-kinasa (ROCK). La retracción deprocesos inducida por 3-NP fue prevenida por Y27632 y por la expresión deCRMP2-T555A, dominante negativa de fosforilación en el sitio de ROCK.Conclusiones: La acumulación de ROS podría regular la dinámica decrecimiento de procesos en OLGs mediante la activación de ROCK y lafosforilación de CRMP2. Este mecanismo podría actuar en condicionesfisiológicas regulando la longitud de procesos y en condiciones patológicas deestrés oxidativo, afectando la normal mielinización en el SNC.