DESARROLLO DE UNA PLATAFORMA BIOLÍSTICA DE TRANSFORMACIÓN ESTABLE PARA EL ESTUDIO DE LA APOMIXIS EN Paspalum notatum

MANCINI MICAELA; WOITOVICH NADIA; PERMINGEAT HUGO; ORTIZ JUAN PABLO; QUARIN CAMILO; PESSINO SILVINA; FELITTI SILVINA

Corrientes

Congreso; XL Congreso Argentino de Genética; 2011

Nuestro grupo identificó varios genes asociados con la apomixis en Paspalum notatum. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una plataforma de transformación para modificar la expresión de estos candidatos en órganos reproductivos de plantas apomícticas y sexuales, que será utilizada para realizar estudios funcionales. En los experimentos de cultivo de tejidos se ensayaron tres tipos de explantos: semillas maduras, embriones maduros y meristemas de vástagos. Los porcentajes de regeneración obtenidos fueron 47 %, 20% y 46%, respectivamente. Los experimentos de transformación transiente fueron realizados sobre callos obtenidos a partir de semillas maduras, utilizando un acelerador de partículas de tungsteno y presiones de helio comprimido de 600, 800 y 1100 psi. Los vectores de transformación incluyeron alternativamente genes de la vía de antocianinas o GFP, ambos clonados bajo el promotor act1 de arroz. El número de células transformadas/100 callos fue de 86 y de 105 para antocianinas y GFP, respectivamente. A partir de curvas de selección para glufosinato de amonio y kanamicina, se eligieron concentraciones de 1 mg/l (% regeneración 12,2) y 50 mg/l (% de regeneración 21,5 plantas totales, 1,2 verdes), respectivamente. Los experimentos de transformación estable se realizaron utilizando presiones de 800 psi y construcciones en horquilla del gen N46 (MAP3K), junto con el selector bar (tolerancia a glufosinato de amonio), ambos bajo el promotor act1 y co-transformando con GFP clonado bajo el promotor act1. El porcentaje de regeneración fue de 16 plantas regenerantes/100 callos bombardeados. Actualmente está en evaluación la introducción estable del transgen.