Mejoramiento de la capacidad adsorptiva de Streamline-DEAE aplicada a recuperar ¦Â-galactosidasa

V. BOERIS; IZABELLA BALCEB,; RAMI REDDY VENNAPUSA; MIGUEL AR¨¦VALO RODR¨ªGUEZ; G. PICO; M. LAHORE

Buenos Aires

Congreso; Sociedad Argentina de Bioqu¨ªmica y Farmacia Industrial; 2011

SaFyBi

La ¦Â-galactosidasa (¦Â-GAL) es una enzima que cataliza la hidr¨®lisis de enlaces ¦Â-galactosidos en substratos variados. Se la utiliza industrialmente en el procesamiento de alimentos l¨¢cticos para reducir el contenido de lactosa en los mismos. Es una prote¨ªna tetram¨¦rica, con un punto isoel¨¦ctrico ligeramente ¨¢cido. En este trabajo se busc¨® obtener ¦Â-GAL a partir de una cepa de levadura recombinante utilizando, para la bioseparaci¨®n, un paso de adsorci¨®n en lecho expandido basado en el principio de intercambio i¨®nico. Esta t¨¦cnica es muy utilizada en la purificaci¨®n de prote¨ªnas a gran escala, debido a factores econ¨®micos, la robustez e idoneidad para la regeneraci¨®n in situ. Resulta una estrategia adecuada para el aislamiento y la purificaci¨®n de enzimas a partir de una materia prima compleja conteniendo part¨ªculas y restos celulares ya que las mismas pueden pasar libremente a trav¨¦s de la matriz sin bloquear el lecho, obstruir el flujo o producir aumentos en la presi¨®n. De esta manera, se consigue la separaci¨®n simult¨¢nea s¨®lido-l¨ªquido y el aislamiento selectivo de la enzima de inter¨¦s. En este caso se plantea el principio de intercambio ani¨®nico ya que resulta  m¨¢s conveniente para la purificaci¨®n de prote¨ªnas con pI ¨¢cido (para una mayor selectividad). Sin embargo, un problema intr¨ªnseco de las matrices de intercambio ani¨®nico es la facilidad en la que unen c¨¦lulas y/o restos celulares (membranas, ¨¢cidos nucl¨¦icos, etc). Una de las modificaciones introducidas al cl¨¢sico proceso de adsorci¨®n en lecho expandido con intercambiadores ani¨®nicos fue el recubrimiento de las matrices con polivinilpirrolidona (PVP), de manera de alterar la superficie de la matriz dificultando la adsorci¨®n inespec¨ªfica de biomasa. El objetivo central de este trabajo fue el desarrollo de una estrategia adecuada para el procesamiento de bioseparaci¨®n de ¦Â-GAL recombinante. Con este fin, se propuso una operaci¨®n robusta, vers¨¢til y validable: la adsorci¨®n en lecho expandido con soportes de intercambio ani¨®nico (Streamline-DEAE). Se plante¨® la posibilidad del recubrimiento de la matriz con PVP con el fin de mejorar la performance del lecho, evitando interacciones entre la matriz y los restos celulares. Se evalu¨® c¨®mo el recubrimiento afecta la capacidad de adsorci¨®n de la matriz sobre la enzima de inter¨¦s.