ESTUDIO ESPECTROSCOPICO Y TERMODINÁMICO DE LA INTERACCIÓN DE POLÍMEROS DE CADENA FLEXIBLE CON UNA PROTEASA PANCREATICA COMO PUNTO DE PARTIDA PARA LA BIOSEPARACIÓN DE MACROMOLÉCULAS.

V. BOERIS; D. ROMANINI; B. FARRUGGIA; B. NERLI; G. PICO

Rosario

Congreso; Reunion anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2006

Sociedad de Biologia de Rosario

El empleo de los polímeros de cadena flexible (PCF) a la bioseparación de proteínas cada vez está mas difundido. Como continuación de estudios previos, el objetivo de este trabajo es estudiar el mecanismo molecular mediante el cual los PCF con y sin carga eléctrica: polivinilsulfonato (PVS), poli meta acrilato (PA) y polióxido de etileno propileno (PEO) forman complejos con una proteasa pancreática: quimotripsina (QT). Se emplearon técnicas de espectroscopia electrónica (espectros de absorbancia, fluorescencia y dicroismo circular). No se halló perturbación del espectro de fluorescencia por parte del PEO, sin embargo PVS y PA indujeron un corrimiento hacia el rojo (»2nm) lo que sugiere un aumento de la polaridad en los entornos de los triptofanos. Los tres PCF incrementaron la hidrofobicidad superficial relativa de la QT, determinada mediante la sonda óptica 1 anilino-8-naftalen sulfonato. PVS y PEO actúan disminuyendo la constante de quenching dinámico de la fluorescencia nativa de la QT con  acrilamida,  lo que supone que actúan como barreras al ataque del quencher sobre los triptofanos. En cambio, PA no indujo cambio significativo. PEO y PVS aumentaron  la actividad biológica de la QT, medida empleando BAEE como sustrato. PA indujo un leve aumento de la señal de dicroismo circular (DC) a 222 nm sugiriendo una estabilización de la alfa hélice, mientras que PEO y PVS no la modificaron. Los resultados de los espectros de dicroismo circular sugieren que los PCF  ensayados no inducen una pérdida en la estructura secundaria en la QT, inclusive que la misma se ve estabilizada. Finalmente todos los PCF incrementaron la estabilidad termodinámica de la QT, obteniendose para esta un Tm = 35,2 °C, la presencia de los PCF pemitieron obtener valores de temperatura promedio de estabilidad (Tm de 41- 46 °C. Los resultados obtenidos con esta proteína permiten determinar que los PCF ensayados no modifican apreciablemente la estructura  secundaria y terciaria del sitio catalítico. Estos serían aptos para ser empleados en sistemas bifásicos acuosos y en la formación de complejos no solubles para aislar y purificar QT.