Efecto del microambiente del hepatocarcinoma sobre el comportamiento de las células estromales mesenquimales humanas

GARCIA MG; BAYO J; REAL A; FIORE E; MALVICINI M,; PICCIONI F; BOLONTRADE M; ANDRIANI O; BIZAMA C; FRESNO C; PODHAJCER O; FERNANDEZ E; GIDEKEL M; MAZZOLINI G

Buenos Aires

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Hepatología; 2015

Introducción: El hepatocarcinoma (HCC) es la tercera causa de muerte por cáncer en el mundo y lostratamientos con intenciones curativas sólo son aplicables en estadios tempranos de la enfermedad.En este contexto, la terapia con células estromales mesenquimales (MSC) para el transporte de genesterapéuticos emerge como alternativa promisoria. El HCC produce citocinas y quimiocinas capacesde reclutar a las MSC hacia el tumor. Una vez que las MSC llegan a ese microambiente, esos factorespodrían modificar su fenotipo y comportamiento. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue estudiarlos cambios producidos en las MSC de origen humano expuestas a los factores producidos por elHCC. Materiales y métodos: Se obtuvieron medios condicionados (MC) de tumores provenientes demuestras de pacientes con HCC (PT-7, PT-12 y PT-19, previa firma del consentimiento informadoy aprobación del protocolo de investigación por el Comité Institucional de Evaluación) incubandopequeños fragmentos de los mismos en medio de cultivo durante 24 horas. También se obtuvieronMC de tumores generados en ratones nude con la línea HuH7 o con el cultivo primario obtenido apartir del tumor de un paciente con HCC (HC-PT-5). Las citocinas presentes en los MC o producidaspor las MSC se evaluaron por un arreglo de anticuerpos. Los cambios producidos en las MSCpor la incubación durante 24 horas con los MC fueron estudiados por microarreglos de cDNA y lacapacidad quimiotáctica in vitro se estudió con una cámara de Boyden modificada. Resultados: Todoslos MC presentaron similar expresión de citocinas siendo GRO, MCP-1 e IL-8 las que presentaronmayor concentración. En ensayos de quimiotaxis se observó que el uso de anticuerpos bloqueantes deMCP-1, CXCR1 o CXCR2 redujo la migración de las MSC hacia los MC de HCC en aproximadamenteun 20%. El uso conjunto de anticuerpos bloqueantes de CXCR1 y CXCR2 disminuyó lamigración de las MSC hacia los MC en alrededor del 50%. La pre-estimulación de las MSC (MSCe)con los MC de HuH7 o HC-PT-5 indujo un aumento de 2 veces en la quimiotaxis hacia los factoresproducidos por el HCC en comparación con las MSCs sin pre-estimular. La pre-estimulación de lasMSC con los MC de PT-7, PT-12, HC-PT-5 o HuH7 mostró la expresión diferencial de 445, 511,521 y 511 genes respectivamente en comparación con las MSC sin pre-estimular, encontrándose 46genes relacionados con la migración celular. Además, los factores producidos por las MSCe (entre ellosMCP-1, Nap2, IP-10, Mip1 y Eotaxina-2) incrementaron la quimiotaxis de fibroblastos y célulasendoteliales en comparación con los factores producidos por las MSC sin pre-estimular. Finalmente,la inoculación de MSCe en ratones portadores de tumores de HuH7 no modificó el crecimientotumoral. Conclusiones: Los factores producidos por el HCC son responsables de la quimiotaxis delas MSC e inducen en estas células cambios en la expresión de genes, producción de factores y efectoquimiotáctico sobre otras células como fibroblastos y células endoteliales, pero no modifican el comportamientode las MSCs sobre el crecimiento tumoral in vivo.