“Gene discovery” en el insecto vector Triatoma infestans.

AVILA, ML; STROPPA, MM; GEREZ DE BURGOS, N; TEKIEL, V; SANCHEZ, DO

Santa Fe

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología.; 2009

Soc. Arg de Protozoología

El objetivo principal de nuestro proyecto es contribuir al descubrimiento de nuevos genes de T. infestans con la idea de generar información que pueda ser de utilidad para desarrollar nuevas estrategias de control de este vector, uno de los más importantes de la Enfermedad de Chagas en Argentina. Para ello estamos generando ESTs [Expressed Sequence Tags, (secuencias parciales de mRNAs)] a partir distintos tejidos y estadíos del vector. Hasta el momento hemos construido 6 bibliotecas diferentes de cDNA y obtenido un total de 1738 ESTs. Las bibliotecas fueron construidas a partir de ARNm extraído de (i) ninfas de 4to estadio; (ii) intestino y (iii) músculo de insectos adultos. Tres de las bibliotecas se construyeron usando Kits comerciales para favorecer el clonado de ARNm completos o el incremento de transcriptos de baja abundancia. Dos se construyeron usando la técnica de ORESTES que incrementa el clonado de la región central de los transcriptos y la restante se construyó digiriendo el ADN copia con una enzima de alta frecuencia y clonando en pGemT-easy.Las secuencias obtenidas fueron comparadas, usando el programa BlastX, con la base de datos de proteínas “nr” del NCBI mediante la herramienta NetBlast. El 38,8% de las mismas presentaron similitud significativa (Evalue <1e-10) con proteínas presentes en la base de datos. El ensamble de este grupo de secuencias generó 89 contigs y 92 singlets; obteniéndose un total de 125 secuencias (contigs + singlets) con similitud significativa con proteínas de otros organismos (no triatomíneos), representando nuevos genes para T. infestans. Por otra parte, 1094 secuencias (62.9%) no dieron similitud significativa, por lo que un porcentaje de las mismas pueden representar nuevos genes no descriptos hasta el presente. Recientemente hemos implementado una estrategia alternativa a los ESTs para descubrir nuevos genes, que consiste en generar GSSs [Genome Sequence Survey, (secuencias de ADN al azar)]. Para ello estamos construyendo mini-bibliotecas de ADN genómico usando enzimas de restriccción de corte frecuente. Hasta el momento hemos secuenciado 63 clones. El 19% de los GSSs obtenidos presentan similitud significativa con proteínas de otros organismos.