Análisis, clonado y expresión de nuevos candidatos vacunales de Trypanosoma cruzi.

ZILIANI, M; SÁNCHEZ, DO; TEKIEL, V

Santa Fe

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología.; 2009

Soc. Arg de Protozoología

<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:"Times New Roman"; panose-1:0 2 2 6 3 5 4 5 2 3; mso-font-alt:"Trebuchet MS"; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:auto; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:50331648 0 0 0 1 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:RU;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:72.0pt 90.0pt 72.0pt 90.0pt; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Previamente, empleando una biblioteca de expresión de cDNA de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi, realizamos ensayos de inmunización genética en ratones e identificamos 22 fragmentos de genes que -en conjunto- conferían protección frente a la infección. Nuestro objetivo actual es re-evaluar a estos nuevos candidatos vacunales para determinar cuál es el menor número (y en qué combinación) que brinda la mayor protección empleando un modelo murino de infección con T. cruzi. Como es bien sabido que las vacunas a DNA (con las que realizamos la identificación de los 22 candidatos originales) no son buenas inductoras de una respuesta inmune tipo B, es que utilizaremos en nuestros próximos ensayos la metodología de inmunización "prime" (DNA) and "boost" (proteína) para obtener una adecuada estimulación de las respuestas T y B. En esta primera etapa, realizamos la expresión de 14 clones que  fueron seleccionados en base a diferentes criterios: i) presencia de epitopes T y B (identificados in silico, NetMHC 3.0 Server, Antigenic Emboss) para maximizar la inducción de ambos tipos de respuesta (9 clones); ii) clones que codifican para proteínas ya conocidas (prot. lisosomal/endosomal de membrana p67, prot. de la familia TcYasp, prot. de superficie asociada a mucinas, prot. de la familia de las trans-sialidasas, etc.) (5 clones); iii) clones que codifican para  péptidos con dominios transmembrana (4 clones) y iv) presencia de péptidos con alto índice de antigenicidad (2 clones). Sólo cinco de los péptidos pudieron ser expresados a partir de su secuencia original, probablemente debido a que el grupo de clones protectivos codifica para péptidos de bajo PM (4,2 - 21 kDa), lo cual hace muy difícil su expresión y purificación en sistemas bacterianos. Por este motivo, los 9 clones restantes se re-clonaron, incluyendo un mayor número de epitopes T, como fragmentos más grandes. Las proteínas se expresaron utilizando los vectores pQE o pGEX, los cuales agregan una cola de poli-His o GST, respectivamente, en el N-terminal de la proteína de interés permitiendo así su posterior purificación. En resumen, en este trabajo hemos realizado el re-clonado y expresión de nuevos candidatos vacunales de T. cruzi que serán utilizados en próximos ensayos de inmunización y desafío.