Patrón de expresión y localización celular de la familia TcTASV de T. cruzi.

GARCÍA, EA; ZILIANI, M; IGLESIAS, AA; SANCHEZ, DO; TEKIEL, V

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2011

Soc Arg de Protozoologia

<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Cambria; panose-1:2 4 5 3 5 4 6 3 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:auto; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:3 0 0 0 1 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin-top:0cm; margin-right:0cm; margin-bottom:10.0pt; margin-left:0cm; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; mso-bidi-font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-ascii-font-family:Cambria; mso-fareast-font-family:Cambria; mso-hansi-font-family:Cambria; mso-bidi-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:EN-US; mso-fareast-language:EN-US;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Patrón de expresión y localización celular de la familia TcTASV de T. cruzi. Garcia E, Ziliani M, Iglesias AA, Sánchez D, Tekiel V. La familia de proteínas TcTASV (por Tripomastigote, Alanina, Serina, Valina) está compuesta por ~40 miembros y fue identificada por nuestro grupo a partir de una biblioteca de cDNA de tripomastigotes. La familia TcTASV está conservada en cepas de diferentes linajes (CL Brener, RA, Sylvio, Dm28) y no posee ortólogos en otros tripanosomatideos. Predicciones bioinformáticas indican la presencia de numerosos sitios de glicosilación y fosforilación y su expresión en superficie. Además, un gen TcTASV fue identificado entre un grupo de antígenos protectivos, lo que sugiere que podrían ser buenos candidatos vacunales. Las características distintivas de la familia TcTASV son las secuencias conservadas en las regiones amino y carboxi terminales; la región central variable permite definir tres subfamilias (A, B, C). Las subfamilias TcTASV-A y TcTASV-C son las que tienen mayor cantidad de miembros. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el patrón de expresión y localización de las familias TcTASV-C y TcTASV-A. Para ello, se produjeron antisueros contra un péptido conservado de la familia TcTASV-A (amino ácidos 57-72 de GenBank AM492199, en conejo) y contra la región interna de un miembro de TcTASV-C (amino ácidos 65-330 de GenBank AZ050960, en ratón) y los anticuerpos purificados por afinidad se emplearon en ensayos de inmunoflorescencia, marcación in vivo y western blot.  TcTASV-C se expresa como una proteína de ~60 kDa principalmente en el estadio tripomastigote y con abundancia relativa diferente entre cepas (CL>Sylvio>RA). TcTASV-C también es detectada en sobrenadantes de medio de cultivo de tripomastigotes, lo que sugiere su expresion en superficie y shedding.  Análisis de citometría de flujo luego de la marcación de tripomastigotes vivos con anti-TcTASV-C confirman su expresión en superficie y diferencial entre cepas (CL: 57%, RA: 24%). Mediante IFI, se detectan tripomastigotes expresando TcTASV-C como puntos discretos en la superficie celular; además es posible observar –en un mismo campo- parásitos fuertemente marcados y otros con intensidad intermedia o sin marca. En contraste, sólo se evidenció marcación para TcTASV-A permeabilizando los parásitos y –si bien hay tripomastigotes débilmente marcados- la mayor intensidad de marca se detecta en formas redondeadas extracelulares (amastigote-like) y amastigotes intracelulares. En conjunto, estos resultados estarían indicando que –aunque ambas familias tienen secuencias consenso para expresión en superficie- TcTASV-A y C no tienen la misma localización y poseen expresión diferencial entre estadios.